28.山药 芡实 : 【中医理论】
山药10～15g,芡实12g,是中医临床常用对药,均能补脾益肾,收涩止泻,固精止带。用于治疗脾肾两虚,妇女白带,腹泻不止等病症。山药性平不燥,作用和缓,平补脾肾,尤以补脾气而益胃阴为特长。芡实益肾而长于收涩,能固下元,扶脾以止泻,固涩而止带,两药合用标本兼顾,收涩止泻,固精止带功效增强,用于治疗体虚白带,或脾虚久泻,遗精,小便不禁等证有较好效果。
【药理研究】
山药粥:怀山药(麸炒)和芡实(麸炒)按2:1混合水煎,50%醇沉分别制成2:1和1:1浓度备用。
大黄水煎液:将饮片温水浸泡2h,然后水煎两次,每次煮沸10min,合并煎液,浓缩成1:1药液(1g/ml)备用。
1.对苦寒泻下加饮食失节型脾虚小鼠模型的影响
取昆明种小鼠50只,雄雌各半,体重20±2g,随机分为5组,分别为:空白对照组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、山药粥大剂量组(Ⅲ组)、山药粥小剂量组(Ⅳ组)、阳性对照组(Ⅴ组),从第1d起造模组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)以40g/kg大黄液灌胃,普通饲料喂养,自由饮水,连续5d,从第6d起改为卷心菜为食,自由饮水,单日以100%精炼猪油灌胃,每只0.4ml,每日1次,同时开始给药:Ⅲ组、Ⅳ组分别按30g/kg、60g/kg灌胃1:1或2:1浓度的山药粥,V组以6g/kg灌胃20%补中益气丸药液,Ⅱ组灌服等体积的生理盐水,连续7d,I组始终以等体积生理盐水作对照。该模型用于胃排空实验、肠推进实验和小肠吸收功能的测定。
1.1 对胃排空运动的影响
实验前禁食12h,自由饮水,末次给药后40min,每只小鼠灌胃0.2ml0.1%甲基橙溶液,20min后脱颈处死,剖腹摘取胃置于小烧杯里,加入10ml蒸馏水,用小剪刀沿胃大弯开胃,将胃内容物充分洗于蒸馏水中、用NaHCO3溶液调节PH值至6.0～6.5,倒入刻度离心管,以2000r/min离心10min,取上清液用分光光度计(波长420nm)比色,用蒸馏水调零点,测量溶液的光密度,为胃中甲基橙光密度,并以0.1%甲基橙0.2ml加入10ml蒸馏水,摇匀后测其光密度,作为基数甲基橙光密度,按下式计算甲基橙胃残留率。

表12-28-1 山药粥对脾虚小鼠胃排空的影响(x±s)

组别 动物数(只) 给药剂量(g/kg) 甲基橙残留率(%) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
补中益气丸 10
10
10
10
10 等体积
40
60
30
6 48.11±8.83
34.52±7.84**
47.08±9.68△△
41.11±5.87△
60.52±9.11△△

与空白对照组比较:**P<0.01;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01
结果表明,与空白对照组相比,模型组的甲基橙残留率明显减少,脾虚小鼠胃排空运动明显亢进(P<0.01);与模型组相比,各用药组均能增加胃中甲基橙残留率,抑制脾虚小鼠的胃排空运动(P<0.01,P<0.05,P<0.01),阳性对照组对脾虚小鼠胃排空的抑制作用明显优于山药粥大、小剂量组(P<0.01)。
1.2.对肠推进运动的影响
实验前禁食24h,自由饮水,将含5%炭末的药液分别灌胃,给药20min后处死,打开腹腔,分离肠系膜,剪取上端自幽门下端至回盲部肠管,轻轻将小肠拉成直线,测量炭末头端在肠管内的移动距离和小肠全长,按下式计算推进百分率。

表12-28-2 山药粥对脾虚小鼠肠推进的影响(x±s)

组别 动物数(只) 给药剂量(g/kg) 炭末推进率(%) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
补中益气丸组 10
10
10
10
10 等体积
40
60
30
6 71.66±7.54
80.69±8.36*
67.88±9.46△△
70.51±9.04△
65.27±12.99△△

与空白对照组比较:*P<0.05;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01
以上结果表明,与空白对照组相比,模型组的炭末推进率明显升高,脾虚小鼠肠推进运动明显亢进,(P<0.05);与模型组比较,各用药组均能明显降低小肠炭末推进率,抑制脾虚小鼠的肠推进作用(P<0.05,P<0.01),各用药组之间比较,其抑制小肠推进作用无显著性差异(P>0.05)。
1.3 小肠吸收功能的影响
末次给药后1h,灌胃3%D-木糖溶液,每只0.2ml,再过1h后摘眼球取血,制备血清。取4支试管分别标记“U”“S”“B”和“Ub”,分别向U管加待测血清0.05ml,S管加标准液0.05ml,B管加水0.05ml,Ub管加正常小鼠血清0.05ml,各管加显色剂5ml混匀,于100℃水浴加热4min,取出置冷水浴中冷却,用分光光度计554 nm波长,10mm光径比色,以B管调零点,读取各管吸光度(A)。

表12-28-3 山药粥对脾虚小鼠小肠吸收功能的影响(±s)

组别 动物数(只) 给药剂量(g/kg) D-木糖(mg/dl) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
补中益气丸组 10
10
10
10
10 等体积
40
60
30
6 14.08±2.93
10.44±1.55*
13.17±2.92△
12.42±2.40△
13.74±2.22△△

与空白对照组比较:* * P<0.01;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01
与空白对照组比较,模型组血清D-木糖含量显著下降,提示脾虚小鼠小肠吸收功能明显降低(P<0.01),与模型组相比,各用药组均能升高脾虚小鼠的血清D-木糖含量,显著增强脾虚小鼠小肠的吸收功能(P<0.05,P<0.01),但各用药组之间比较无统计学意义(P>0.05)。
2.对苦寒泻下加饮食失节型脾虚大鼠模型的影响
取Wistar大鼠50只,雌雄各半,体重180±20g,随机分为5组,分别为:空白对照组(Ⅰ组)、模型组(Ⅱ组)、山药粥大剂量组(Ⅲ组)、山药粥小剂量组(Ⅳ组)、阳性对照组(Ⅴ组),从第1d起造模组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)以20g/kg大黄液灌胃,普通饲料喂养,自由饮水,连续5d,从第6d起改为卷心菜为食,,平均60g/只,单日以100%精炼猪油灌胃,每日2次,每次3ml,同时开始给药:Ⅲ组、Ⅳ组分别按20g/kg、40g/kg灌胃1:1或2:1浓度的山药粥,Ⅴ组以4.2g/kg灌胃20%补中益气丸药液,(或以0.784g/kg灌服多酶片药液),Ⅱ组灌服等体积的生理盐水,连续7d,Ⅰ组始终以等体积生理盐水作对照。该模型用于胃酸和胃蛋白酶活性的测定、血清淀粉酶活性的测定和血浆胃动素含量的测定。(注:胃酸和胃蛋白酶活性的测定实验中阳性对照组灌服多酶片药液,其余两个实验中阳性对照组灌服补中益气丸药液。)
2.1 对胃酸和胃蛋白酶活性的影响
实验前严格禁食24h,用乙醚轻度麻醉动物,剪去腹部毛,常规消毒皮肤,于剑突下沿腹白线开一个长约2.5cm切口,小心提起胃,在幽门与十二指肠结合部用缝线结扎,小心避开血管,立即自十二指肠分别注入生理盐水、山药粥大、小剂量及多酶片药液,缝合创口后送回笼中,术后禁食禁水,5h后脱颈处死,取出胃,收集胃液于刻度离心管,以3000r/min离心15min,吸取上清液进行胃液分析。胃酸测定:采用滴定法。取清晰胃液2ml置于小烧杯中,加入的托佛氏试剂及酚酞指示剂各2滴,此时胃液呈樱桃红色。用0.02mol/LNaOH滴定,同时不断摇动烧杯,至红色消失,出现姜黄色为止,即为游离酸滴定终点,记录消耗NaOH溶液的毫升数,用V0表示。继续用NaOH滴定至微红色不退为止,即为总酸滴定终点,记录两次滴定所消耗的NaOH的总毫升数,用V表示。按下式计算游离酸及总酸度。游离酸(mmol/L)=V0×10 总酸度(mmol/L)=V×10。
胃蛋白酶活性测定:采用麦特氏毛细玻璃测定法。将内径1～2mm粗细匀称的毛细玻管洗净烤干。用鸡蛋一枚,取其蛋清充分打匀后用纱布过滤,将上述毛细玻管利用虹吸作用,灌满蛋清(注意管内应无气泡)。然后放入85℃热水中使蛋白凝固,贮冰箱中备用。试验时取胃液1 ml放入50ml三角烧杯中,每只烧杯中加0.05mol/L盐酸溶液15 ml摇匀,放入蛋白管二根,塞好瓶口,在37℃恒温箱中孵育24 h,取出蛋白管,分别测量蛋白管两端透明部分的长度(mm),以四端之值相加,求其平均值,按下式计算胃蛋白酶活性单位(U)。胃蛋白酶活性单位(U)=平均值2×16。

表12-28-4 山药粥对脾虚大鼠胃酸和胃液量的影响(±s)

组别 n 给药剂量
(g/kg) 胃液量
(ml) 游离酸
(mmol/L) 总酸度
(mmol/L) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
多酶片组 10
10
10
10
10 等体积
20
40
20
0.784 6.38±1.52
4.41±1.07*
5.62±1.31△
5.02±1.65
6.20±1.38△△ 62.9±11.58
48.9±8.71*
61.6±10.74△
57.2±9.08
72.3±11.85△△ 92.8±13.55
76.1±9.71*
91.5±11.87△△
86.4±10.04△
103.9±14.12△△

与空白对照组比较:*P<0.05;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01

表12-28-5 山药粥对脾虚小鼠胃蛋白酶活性的影响(±s)

组别 动物数(只) 给药剂量(g/kg) 胃蛋白酶活性(U) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
多酶化组 10
10
10
10
10 等体积
20
40
20
0.784 154.90±33.86
112.58±21.00**
139.49±24.12△
123.03±26.11
171.60±41.40△△

与空白对照组比较:** P<0.01;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01
以上结果表明:与空白对照组相比,模型组的胃液量明显减少(P<0.01),与模型组相比,阳性对照组和山药粥大剂量组均可明显增加脾虚大鼠的胃液量(P<0.01,P<0.05),而山药粥小剂量组的作用不明显(P>0.05)。多酶片阳性对照组促进胃液分泌作用优于山药粥大剂量组,但无统计意义(P>0.05)。
阳性对照组和山药粥大剂量组均可明显增加脾虚大鼠的游离酸含量(P<0.01,P<0.05)山药粥小剂量的作用不明显(P>0.05),各用药组比较,它们对增加游离酸的分泌量无显著差异(P>0.05)。
各用药组均可使脾虚大鼠总酸分泌量显著增加(P<0.01,P<0.05,P<0.001),阳性对照组促进总酸的分泌作用明显优于山药粥大、小剂量组(P<0.05,P<0.01)。
阳性对照组和山药粥大剂量组均可使脾虚大鼠胃蛋白酶活性显著增加(P<0.01,P<0.05),山药粥小剂量组的作用不明显(P>0.05),各用药组增加胃蛋白酶活性的作用无显著差异(P>0.05)。
2.2 对血清淀粉酶活性的影响
末次给药后1h,断头取血,制备血清。按α-淀粉酶(α-Amylase)试剂盒说明书操作。山药粥对脾虚大鼠血清淀粉酶活性的影响见表12-28-6。

表12-28-6 山药粥对脾虚大鼠血清淀粉酶活性的影响(x±s)

组别 动物数(只) 给药剂量(g/kg) 血清淀粉酶活性(苏氏单位/dl) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
补中益气丸组 10
10
10
10
10 等体积
20
40
20
4.2 934.90±85.81
839.33±80.58*
935.78±80.72△
908.92±70.59
942.17±78.28△△

与空白对照组比较:* P<0.05;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01
结果表明:与空白对照组相比,模型组血清淀粉酶活性显著下降(P<0.05),与模型组相比,阳性对照组和山药粥大剂量组能显著增强脾虚大鼠血清淀粉酶活性(P<0.01,P<0.05),山药粥小剂量组的作用不显著(P>0,05),阳性对照组增强脾虚大鼠血清淀粉酶活性的作用明显优于山药粥大剂量组(P<0.05)。
2.3 对血浆胃动素含量的影响
末次给药后1h,眼眶采血2ml,置于含30ul 10% EDTA二钠和30μl抑肽酶塑料管中混匀,4℃3500r/min离心15min,分离血浆,置-80℃以下保存待测,具体操作按胃动素放免试剂盒说明进行。

表12-28-7 山药粥对脾虚大鼠血浆胃动素的影响(x±s)

组别 n 给药剂量(g/kg) 血浆胃动素(pg/ml) 空白对照组
模型组
山药粥大剂量组
山药粥小剂量组
阳性对照组 10
10
10
10
10 等体积
20
40
20
4.2 420.00±76.57
503.17±74.77*
434.57±69.18△#
468.44±74.58
425.38±63.24△

与空白对照组比较:* P<0.05;与模型组比较:△P<0.05
结果可见:与空白对照组相比,模型组血浆胃动素含量显著升高(P<0.05),与模型组相比,山药粥大剂量组和阳性对照组均能降低脾虚大鼠血浆胃动素含量(P<0.05),但二者相比,无统计学意义(P>0.05),山药粥小剂量组降低脾虚大鼠血浆胃动素的作用不明显(P>0.05)。