1.人参 附子 : 【中医理论】
人参半两(1.5g)、附子(炮,去皮脐)一两(3g),作三服,加生姜十片,水煎服,《医方类聚》卷一五O引《济生续方》^[1],称参附汤,《古今医统》卷二十二又称“附参汤”,具有益气回阳固脱之功,主治元气大亏,阳气暴脱,汗出厥逆,喘促脉微,欲绝之危在顷刻者。人参甘平,大补元气,补脾益肺,生津安神;附子辛热,回阳救逆,温肾助阳,祛寒止痛。人参以补气强心为主,附子以助阳强心为要。二药伍用,相互促进,温阳益气,回阳救逆之力增强。正如《医宗金鑑》谓:“补后天之气无如人参,补先天之气无如附子,此参附汤之所由立也。二脏虚之微甚,参附量为君主。二药相须,用之得当,则能瞬息化气于乌有之乡,顷刻生阳于命门之内,方之最神捷者也。”《血证论》又谓:“人之元气,生于肾而出于肺,肺阳不能制节,肾阳不能归根,则为喘腹之证,用附子入肾以补阳气之根,用人参入肺以济生气之主,二药相济,大补之气,气为水为阳,水即气之阴,人参是补气之阴,附子是补火之阳,知此,则知一切补气之法。”
人参、附子配伍在理论上探讨主要集中在如下两个方面。
1.量随证变,治有主次
药量是决定方中药物药力大小的重要因素,改变药物的用量配比,使之量随证变,以便切合病证,增强疗效。《校注妇人良方》之参附汤重用人参,参附之比为2:1,意在加大补气、生津、固脱之力。《正体类要》治金疮、杖疮,失血过多,阳随阴走者。用人参四钱,炮附子三钱,水煎服,阳气脱陷者倍用之。方中调整了参、附用量比例,以增强峻补阳气,回阳固脱之力。《圣济总录》卷四十四的“附子汤”,乃参附汤之变方,以人参、附子等分,益气补中与温肾助阳并重,治脾肾虚寒,不时易泻,腹痛,阳痿,怯寒等证,有补火壮阳,火能生土之用。《医宗金鉴》用参附汤治风邪中脏,形气俱虚,其证唇缓不收,痰涎流出,神昏不清,身肢偏废,或与五脏脱证并现者,则“大倍人参,先固虚脱”,寓“无形之气所当急固”之妙义。一俟气旺厥回神清,病情稳定,次治风邪,此即病有急缓,治有主次。《辨证录》卷三之“独参汤”则以人参三两,附子三分组方,以独重人参为君药,而得名,以与“参附汤”相区别。煎汤灌服,用治久痢之后,下多之阴,阴虚而阳暴绝之昏作,小便自遗,汗大出不止之急症。重用人参大补元气,佐附子温阳补火,实为救逆之良方。阳回则阴液身化,庶有生机矣。
2.剂型变更,病有缓急
病有缓急轻重,治当分清峻补与缓养,适当地改变剂型,使其更能切合病情。如《景岳全书》参附汤,缓慢温补方可奏效,不急于求其速效于一时,故以参、附各等分。炼白蜜丸如绿豆大,每用白开水送下三五分或一钱。是方改汤为丸,使其药峻而力缓,药效慢而持久。参附汤对多种休克均有较好疗效,对心源性休克、感染中毒性休克疗效更佳。剂型改为注射液较汤剂应用更为安全、方便,起效更为快速,疗效亦大为提高。如常用制剂参附注射液,静脉滴注,有益气活血,回阳救脱,强心生脉之效,用于元气大亏,阳气暴脱,手足厥冷,呼吸微弱,脉微及心源性休克、感染性休克、中毒性休克、创伤性休克等。
总之,参附汤为益气回阳之有效方剂,历代医家在其基础上灵活化裁,因证施方,使其更富针对性和实用性,对于临床有效地运用该方和研制开发新药均有可借鉴之处。
【药理研究】
1.理化鉴别^[2]
取本品2ml置具塞试管中,用力振摇1min,产生多量蜂窝状泡沫,放置10min,泡沫无显著消失。
取本品约2ml,分别置于两支小试管中,加0.5ml稀盐酸,分别加碘化铋钾试液(或碘化汞钾)或碘化铋钾试液即发生棕色沉淀或黄色沉淀。
取本品1ml,置小蒸发皿中,于水浴上蒸干,滴加醋酐0.5ml,使溶解,移入小试管中,沿壁加浓硫酸约0.5ml,两液交界面呈现棕红色环。
2.人参、附片的薄层层析鉴别^[2]
供试品液的制备:取本品5ml,置水浴上蒸干,残留物加95%乙醇约1ml,搅拌使溶解,备用。对照品液的制备:分别取按同一工艺制成的单味药人参、附子注射液各5ml,置水浴上蒸干,残留物加95%乙醇约1ml,搅拌使溶解,备用。
操作方法:吸取供试品液、人参注射液对照品液或供试品液、附片注射液对照品液,点样3～8μl于同一块硅胶G薄层板上,用氯仿-甲醇-水(65:35:10或80:20:2)作展开剂,喷洒10%硫酸乙醇液显色,所呈紫红色斑点不得少于7个;或喷洒稀碘化铋钾试液与碘化铋钾试液(1:1)混合液。供试品液与附片注射液对照品液的层析谱基本一致。所呈现黄色色斑不得少于4个。
3.限量检查
3.1 乌头碱限量的薄层层析检查^[2]
供试品液的制备:取本品10ml,置水浴上蒸干,残留物加95%乙醇1ml,搅拌使溶解,移入2ml容量瓶中,用乙醇稀释至刻度,摇匀,备用。乌头碱标准液的制备:精密称取乌头碱标准品(USP X.E Merck)2mg,加95%乙醇使溶解,移入10ml容量瓶中,用乙醇稀释至刻度,摇匀,备用。薄层层析条件:采用硅胶G为吸附剂,展开剂以乙醚-氯仿-甲醇(1:2:1)或苯-醋酸乙酯-二乙胺(7:2:1)效果为佳。喷洒稀碘化铋钾试液与碘化钾试液(1:1)混合液为显色剂。按上述层析条件实验,结果表明:乌头碱0.4μg呈现可见色斑,0.6μg即呈现明显的色斑。用微量进样器分别吸取供试品液及乌头碱标准液,分别点样供试品液20μl,乌头碱标准液3μl、5μl于同一块硅胶G板上,依上述方法展开、显色后,供试品液层析谱与乌头碱Rf值相应的位置不呈现色斑或所呈现的色斑不得比乌头碱标准液3μl呈现的色斑更深。
3.2 钙盐及镁盐的限量检查^[2]
附片系附子的炮制品,炮制过程经盐卤浸渍、蒸煮等。引入钙盐、镁盐等皆具有生理活性,其量也因炮制方法不同而有差异。
测定方法:精密吸取本品5～10ml,加蒸馏水5ml,加氨-氯化铵缓冲液(pH10)2ml,铬黑T指示剂(固体粉末)适量,用0.02mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定,至紫红色转变为纯蓝色,即达终点。由消耗0.02mol/L乙二胺四醋酸二钠液的量计算求得钙盐及镁盐的总量。
精密吸取本品5～10ml,加蒸馏水5ml,加10%氢氧化钠溶液使溶液至pH12以上,加指示剂适量,用0.02mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至粉红色转变为纯蓝色,20sec不返红色,即达终点。由消耗0.02mol/L乙二胺四醋酸二钠液的量计算得钙盐含量。再用减差法计算求出镁盐含量。结果如表12-1-1。

表12-1-1 参附注射液中钙盐镁盐含量测定结果

样品 钙盐镁盐总量
(mM/mL) 钙盐含量
(mM/mL) 镁盐含量
(mM/mL) 备 注 1
2
3
4 0.01837
0.02911
0.0085
0.0085 0.01813
0.02885 0.00024
0.00026 脱钙工艺
脱钙工艺 5
6 0.1066
0.04659 0.09938
0.0402 0.00722
0.00657

4.含量测定
4.1 人参总皂苷的含量测定(比色法)
方法1^[2]
标准曲线的绘制:精密称取人参二醇标准品约5mg,加甲醇溶解,移入5ml容量瓶中并稀释至刻度。精密吸取10、20、30、40、50、60μl,置玻塞试管中,用热风挥去溶剂,加5%香荚醛-冰醋酸溶液(新配制)0.2ml、高氯酸0.8ml,于60℃恒温水浴上加热15min,立即置冰浴内,冷却,加冰醋酸5ml,摇匀,于560nm处测定吸收度。同时,以试剂作空白试验。测得的吸收度经统计学直线回归分析处理,得回归方程式,以校正值绘制浓度-吸收度曲线。回归方程式:
A=0.008+8.696C,r=0.9995。
供试品测定:精密吸取本品10ml,于水浴上蒸干,残留物加甲醇分数次充分搅拌使溶解,并移入5ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。精密吸取供试品溶液20～30μl(相当人参总皂苷约100μg),置具塞试管中,用热风挥去溶剂,依标准曲线项下操作测定吸收度,测得吸收度查标准曲线求出相当的人参二醇量,按下式计算求出人参总皂苷含量。

C:相当人参二醇量(mg);V:点样量(ml);2.5:人参二醇皂苷元组皂苷平均分子量与人参二醇分子量之比。
回收率试验:精密称取人参(根)总皂苷对照品一定量各两份,加附片注射液使溶解,并分别移入10ml容量瓶中,加附片注射液至刻度,摇匀,即得已知人参总皂苷含量的参附注射液。依上述方法测定其人参总皂苷含量。回收率为100.9±2.88%～102.6±1.90%。
不同批号注射液中人参总皂苷的含量测定,结果如表12-1-2。

表12-1-2 7批参附注射液中人参皂苷含量测定结果

样品 人参皂苷含量(mg/ml) 备 注 1
2
3
4
5
6
7 0.705
0.687
0.967
0.594
0.764
1.08
0.783 研制小试产品
每批1000～2000ml

方法2^[3]
标准曲线的制备:精密称取人参二醇标准品约2mg,置1ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。用微量进样器吸取15、25、35、45、55μl,置干燥具塞试管中,挥干溶剂。加入新配制的5%香荚醛冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml,摇匀,密塞,置60℃恒温水浴中加热15min,立即以流水冷却,加冰醋酸5ml,混匀,于560nm处测定吸收度,随行空白,绘制浓度-吸收度曲线。供试品液制备:精确量取样品溶液2份(每份相当人参生药1 g),分别置于50ml分液漏斗中,以乙醚脱脂4次(15ml×1,10ml×3),醚层用少量水洗涤,将洗涤水并入水层中,水层再用水饱和的正丁醇萃取5次(15ml×1,10ml×4),弃去水层,正丁醇层用少量水萃取1次,水层再用正丁醇萃取1次,弃去水层,合并正丁醇液,减压回收正丁醇至干。残留物以少量甲醇溶解,仔细地移到2ml容量瓶中,稀释至刻度。
薄层层析:吸附剂为硅胶G。展开剂用氯仿-甲醇-水(70:55:10),并于层析缸内放入盛有少许定量冰醋酸的小杯。显色剂为碘蒸气。待皂苷显黄色斑点,立即取出,描记出斑点位置。
比色测定:将皂苷斑点刮入磨口带塞试管中,并取与色斑相当量的前沿硅胶为空白,同标准曲线显色,离心分离,吸取上清液置比色皿中,于560nm处比色测定。测得吸收值,查人参二醇标准曲线求出相当人参二醇的微克数,计算人参皂苷含量,供试品中人参皂苷含量(%)=测得吸收值相当人参二醇的微克数(A)×2.5×100/取样品量相当于生药的微克数(W)。
4.2 乌头类生物碱的含量测定(离子对萃取-分光光度法)^[2]
标准曲线的绘制:精密称取乌头碱标准品12.97mg,加1N盐酸数滴使溶解,移入100ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。每ml含乌头碱0.1297mg。精密量取乌头碱标准液0.5、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00ml,分别置于分液漏斗中,各加入蒸馏水2.50、2.00、1.75、1.50、1.25、1.00ml,加pH6的邻苯二甲酸氢钾缓冲液5.0ml、溴麝香草酚蓝指示液2.0ml、氯仿10.0ml,振摇3min,静置1h,分取氯仿液,过滤。同法以蒸馏水3.0ml作空白试验。用751型分光光度计,于410nm处测定吸收度。测得的吸收度经统计学回归分析处理,得回归方程式,A=0.0058+2.952C,r=0.9992。以校正值绘制浓度-吸收度曲线。
供试品的测定:取安瓿(2ml)10支,倾出注射液,混匀。精密量取10.0ml,加氨试液调至pH10～11,用氯仿萃取5次,收集氯仿液,回收氯仿后,残留物加少许盐酸使溶解,移入10ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀,备用。精密量取供试液2.0ml,依上法测定。测得的吸收度查标准曲线求出相当乌头碱量。按下式计算乌头类生物碱含量。

C:相当乌头碱量(mg);0.9349:换算因素为乌头次碱分子量与乌头碱分子量之比。
回收率试验:已知乌头碱浓度的参附注射液的制备:精密称取乌头碱标准品一定量,加入人参注射液使溶解,移入100ml容量瓶中,加入人参注射液至刻度,摇匀,备用。测定:分别精密量取已知浓度的参附注射液10.0ml,加氨试液调至pH10～11,用氯仿萃取,收集氯仿液,按上法制成供试品液10.0ml。然后,分别精密量取供试品液2.0ml,依法测定。以加入量与测得值计算参附注射中乌头碱回收率为97.78±1.01%(n=12)。加样回收试验:取已测定乌头类生物碱含量的参附注射液(811201),精密量取10ml,加入乌头碱标准品一定量,摇匀,加氨水调至pH10～11,用氯仿萃取后,同前法制成供试液10ml。精密量取供试液1.0ml,依法测定,测得值减去注射液中乌头类生物碱含量,与加入量计算回收率。实验结果:参附注射液中乌头碱加样试验回收率为95.68±1.84%(n=9)。
不同批号注射液中乌头类生物碱的含量测定:按上法经氯仿萃取分离后,用离子对萃取-分光光度法测定。结果如表12-1-3。

表12-1-3 6批参附注射液中乌头类生物碱含量测定结果

样品 乌头类生物碱含量(mg/ml) 测定次数 1
2
3
4
5
6 0.0598
0.0337
0.0187
0.0439
0.0243
0.0252 9
3
3
3
3
3

5.半仿生提取与化学成分的分析^[4]
张兆旺等进行剂改研究,依据SBE法理论,以人参二醇、人参三醇、总生物碱、酯型生物碱、总糖和干浸膏为指标,用均匀设计法优选其SBE法工艺条件。
确定考察因素与水平:根据SBE法及附子炮制原理,在药材粒度、煎提温度、煎煮加水量、滤过、浓缩等条件相同的提下,确定考察主要因素及水平。
选用均匀设计表安排实验:U9(91×33)表安排各因素水平进行实验,实验方案见表12-1-4。

表12-1-4 U9(91×33)均匀设计表

实验号 A
第1煎
水pH值 B
第2煎
水pH值 C
第3煎
水pH值 D
第4煎
水pH值 1
2
3
4
5
6
7
8
9 2.00
4.00
2.50
3.00
5.50
3.50
4.50
5.00
6.00 7.00
6.50
6.50
7.50
7.00
7.00
7.50
7.50
6.50 9.00
9.00
8.00
8.50
8.00
8.00
9.00
8.50
8.50 3.50
7.00
5.25
7.00
7.00
3.50
5.25
5.25
3.50

提取液的制备:将处方药材分别粉碎,取12～30目粗粉,人参28g,生附子21g,混匀。常压下加热回流提取3次(溶剂量分别为药材重量的10,6,6倍;3次提取时间比为2:1:0.5),溶剂水的pH值及提取时间按表12-1-4规定,提取液4层纱布加100目筛分别滤过,离心,合并上清液并浓缩定容至500ml。制得1～9号提取液(每1ml相当于原药材0.098g)。
人参二醇、人参三醇的含量测定:供试液的制备:精取上述提取液50ml,浓缩至约35ml,加乙醇12.5ml和浓硫酸2.5ml,水浴回流4h,加水稀释至70ml,精取50ml,用适量氯化钠饱和,乙醚萃取5次(20,20,20,15,10ml),合并萃取液,用0.125mol·L-1的氢氧化钠溶液(50,30ml)洗涤乙醚液2次,再用少量水洗涤乙醚液至中性,用无水硫酸钠脱水,滤过,回收乙醚至干,残留物用氯仿溶解并定容至2ml,即得(每1ml相当于原药材1.75g)。对照液的制备:精密称取人参二醇1.4mg,人参三醇1.2mg,分别用氯仿定容至2ml,即得。标准曲线的制备:薄层扫描条件:人参二醇λS 535 nm,λR700nm;人参三醇λS530nm,λR700nm,灵敏度:中;SX=3;狭缝1.20mm×1.20mm;双波长反射式锯齿形扫描。标准曲线的制备:在0.3% CMCNa-硅胶C薄层板上分别点人参二醇对照液2.0,4.0,8.0,12.0,16.0,20.0μl;人参三醇对照液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0μl,用氯仿-乙醚(1:1)展开15cm,挥干溶剂,喷10%硫酸乙醇,80℃烘10min,显色,扫描。以点样量为横坐标,峰面积为纵坐标作图,二者均得一不过原点的直线。人参二醇线性范围1.4～14.0μg,回归方程为Y=1775.0655X-9 57.1459,r=0.9987(n=6);人参三醇线性范围1.2～7.2μg,回归方程为Y=2444.4542X-1756.0173,r=0.9973(n=6)。供试液的含量测定:精取上述供试液24.0μl,人参二醇对照液4.0,6.0μl,人参三醇对照液4.0,12.0μl分别点于同一块薄层板上,按上法展开,显色,扫描,结果见表12-1-5。
总生物碱的含量测定结果见表12-1-5。
酯型生物碱的含量测定:对照液的制备:精密称取乌头碱对照品9.8mg,置10ml容量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度。标准曲线,以乌头碱含量为横坐标,吸收度为纵坐标作图,得一不过原点的直线,乌头碱线性范围0.245～2.450mg,回归方程为Y=0.1100X-0.0073,r=0.9979(n=6)。含量测定结果见表12-1-5。

表12-1-5 综合各指标成分含量及标准化处理结果 g·100g-1

实验号 人参二醇 人参三醇 总生物碱 酯型生物碱 总糖 干浸膏 Y 1 0.0475
(-0.8010) 0.0150
(-0.0476) 0.1631
(0.8877) 0.0163
(0.4444) 10.1927
(-0.2931) 36.9388
(1.1012) (-0.3006) 2 0.0610
(-0.1175) 0.0152
(-0.0062) 0.1231
(-0.2106) 0.0114
(-0.8835) 14.2448
(1.4881) 36.3741
(0.8239) (11.7193) 3 0.0458
(-0.8871) 0.0112
(-0.8344) 0.1279
(-0.0788) 0.0118
(-0.7751) 10.2549
(-0.2658) 34.0884
(-0.2987) (-8.1105) 4 0.0774
(0.7129) 0.0123
(-0.6066) 0.1011
(-0.8147) 0.0138
(-0.2331) 12.1357
(0.5610) 36.9218
(1.0929) (2.6709) 5 0.0523
(-0.5580) 0.0133
(-0.3996) 0.0658
(-1.7839) 0.0125
(-0.5854) 12.7789
(0.8437) 34.3129
(-0.1884) (-10.1270) 6 0.0988
(1.7965) 0.0180
(0.5735) 0.1886
(1.5879) 0.0126
(-0.5583) 7.9384
(-1.2841) 32.3402
(-1.1572) (18.4892) 7 0.0419
(-1.0846) 0.0093
(-1.2277) 0.1605
(0.8163) 0.0122
(-0.6667) 10.9810
(0.0534) 34.8265
(0.0638) (-4.5708) 8 0.0594
(-0.1985) 0.0170
(0.3665) 0.1179
(-0.3534) 0.0208
(1.6640) 12.0666
(0.5306) 35.4694
(0.3796) (-7.8352) 9 0.0858
(1.1382) 0.0258
(2.1884) 0.1289
(-0.0513) 0.0205
(1.5827) 7.1431
(-1.6337) 30.9966
(-1.8171) (-1.8305)

注:括号中数据为标准化处理后结果
Y=(人参二醇+人参三醇+总生物碱一酯型生物碱)×6+总糖×4+干浸膏×3总糖的含量测定:供试液的制备:分别精取上述提取液2.0ml,加95%乙醇,使含醇量达85%,静置冷藏24h,过滤,取沉淀加适量水溶解,滤过,加水定容于250ml容量瓶中,即得。对照液与显色剂的配制:精密称取干燥至恒重的葡萄糖5.0mg,置50ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照液。称取蒽酮0.12g,置100ml容量瓶中,加入95%硫酸溶解并稀释至刻度,冷却至室温,即得0.12%蒽酮显色试剂(临用现配)。标准曲线的制备:精取葡萄糖对照液0.20,0.40,0.60,0.80,1.00ml,分别置干燥具塞试管中,补加蒸馏水使成2.00ml,分别加入0.12%蒽酮试剂4.00ml,混匀,放至室温。以蒸馏水2.00ml,加蒽酮试剂4.00ml为随行空白,在625nm处测定吸收度。以葡萄糖含量为横坐标,吸收度为纵坐标作图,得一不过原点的直线,葡萄糖线性范围0.02～0.10mg,回归方程式为Y=7.35X-0.026,r=0.9992(n=5)。含量测定:结果见表12-1-5。
干浸膏得率的测定:精取提取液制备项下提取液50ml,置已烘干恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于105℃烘至恒重,计算干浸膏得率,结果见表12-1-5。
实验结果的处理:综合人参二醇、人参三醇、总生物碱、酯型生物碱、总糖和干浸膏得率结果于表12-1-5。并将各个数据按公式进行标准化处理,为9次实验每种指标成分结果的平均值,S为其标准差。将表12-1-5中Y的数据输入计算机,用JYSYSJ的数据分析模块处理,经多元线性逐步回归统计处理,F检验未通过,改用二次多项式逐步回归得回归方程(选入、剔除阈值均为0.1):Y=421.6545+17.20905A-39.26281C-110.4891D-2.516703AA+3.944085DD+0.2897563AD+7.729469CD。r=0.9999811,S=2.797384E-02,F=3780.865
查F值表F表0.05(7.1)=236.8,F0.05(7.1)<F,所以F检验通过,回归方程有意义。再将方程在计算机上进行优化处理(Y的期望方向:大),得出优化结果。采用均匀设计法对参附汤SBE法工艺条件进行优选,根据GLP(good lattice point)法优选结果,结合生产实际,三煎用水pH值依次为3.50,7.00,8.00;煎煮时间依次为2、1、0.5h。
6.提取液树脂处理研究^[5]
树脂预处理及其质控指标:通过对HP3、DA201、D160A、LD601等四种树脂可溶出性杂质分析,认为可将其分成水溶出性、醇溶出性两类物质予以处理。实验表明:树脂先用蒸馏水漂洗,可有效地除去水溶出性杂质,并用处理液的电导率、易氧化物作为控制指标;然后,用95%乙醇回流搅拌洗脱,对醇溶出性杂质洗脱能力较强,并以对处理液的水稀释、易氧化物、荧光和紫外吸收等项目作为控制精制程度。认为经预处理后的主要指标可达到《日本药典》的有关规定。树脂经处理后,用95%乙醇浸泡过夜,浸泡液按注射液制备工艺处理后获得的空白水溶液,测得其LD50>50 ml/kg,说明空白液毒性极小。大孔吸附树脂对人参皂苷的吸附和解吸:通过对人参皂苷的静态吸附速度和动态吸附容量的测定表明:其中以LD601树脂吸附速度最快,LD601、DA201型树脂动态吸附容量较大,二者对总提取液的人参皂苷吸附容量约为15mg/ml树脂。溶液pH值中性时其吸附皂苷能力最佳。同时,考察了不同浓度乙醇对人参皂苷的解吸回收率,结合薄层层析鉴别和引入树脂杂质的可能性,认为以选择55%、75%乙醇解吸,解吸回收率即能达到70%以上;解吸液中较完整的保留了人参总皂苷。
人参提取工艺:在人参提取物精制中经试验筛选,采用LD601型树脂吸附、水和20%乙醇洗涤吸附树脂,55%乙醇解吸。解吸后的人参提取物水溶液外观、色泽有较大改善,配液后,经适当处理,制品澄明度符合注射剂要求。
附片提取工艺:附片的主要有效成分为多种相似结构的二萜酯类生物碱,即乌头碱,乌头碱有剧毒,但经水解除去乙酰基,相应产物毒性大大降低;附片提取物如法处理还不能保证注射液的澄明度,故在原工艺基础上,增加了二次碱性醇沉,制品澄明度符合要求。
配液后的处理:人参、附片提取物配液前pH值均应调至pH7～8,且二者差异不宜太大,混合后,放置一定时间,滤除沉淀有利于澄明度改善,且有效成分含量不变,配合适量活性炭处理,可提高制品澄明度及稳定性。综上所述,用LD601型大孔吸附树脂精制人参提取液,总皂苷回收率较好;基本解决了注射液的澄明度问题,制品各项检查符合注射剂要求,具有明显的药理作用;且工艺简单,产品成本低。
7.其他
陈氏^[6]通过观察参附注射液与葡萄糖注射液等常用输液配伍的外观、pH值及含量变化等指标,考查了参附液的配伍稳定性。结果表明,室温配伍后24h内各混合液均澄清,除碳酸氢钠外,其余混合液pH值稳定,含量基本无变化。
杨氏^[7]将参附散制成口服液,并采用TLC法对人参、附子的成分进行色谱鉴别。
【药理研究】
1.对心血管系统的影响
1.1 对心肌细胞膜ATP酶活性的影响^[8]
将动物断头处死后,迅速取出心脏0.6～0.8g,在冰浴的蒸发皿内剪碎后,置于冰浴组织匀浆器(自制)中。加入适量的试剂Ⅰ液,匀浆分2次进行,每次半分钟(2×30s,间隔1min)。立即通过2层纱布过滤,收集滤液。滤液在0～2℃下1000r/min离心20min。沉淀再加试剂Ⅰ液约10ml,不断搅拌洗涤,再以同样的条件离心分离1次,再取沉淀加约10ml试剂Ⅱ液混匀后,在2℃冰箱中放置44～48h。然后,再按上法离心分离沉淀。沉淀用试剂Ⅲ液洗涤2次,每次约10ml(离心条件同前),最后取沉淀悬浮在约10ml试剂Ⅳ液中,作为心肌细胞膜ATP酶液。
心肌细胞膜ATP酶活性是以每小时每毫克膜酶蛋白水解ATP所产生的无机磷(pi)微克分子量表示。即μMpi/mg·h-1。本实验加入试验药后酶活性受到抑制程度是以酶的相对活力和抑制百分率表示(酶的相对活力是加入试验药后酶活性与同批全酶活性之比的百分数;抑制率是以100%减去酶的相对活力)。考虑到不同个体的大鼠心肌膜ATP酶对药物的敏感性可能有差异,因而本实验采用了7只大鼠心脏所制备的心肌膜ATP酶进行实验。结果见表12-1-6,表12-1-7和表12-1-8。

表12-1-6 对大鼠心肌膜ATP酶活性的影响

　 毒 G(mM) 0 0.1 0.15 0.2 酶的相对活力(+S)
抑制率(%) 100
0 93.3±0.41
6.68 79.75±2.75
20.25 79.2±2.08
20.80

对测定6只大鼠心肌膜ATP酶总活力为32.73±1.89μMpi/mg·h-1。ATP酶总活力减去加入0.2mM毒G的酶活力为生理状态的Na+K+-ATP酶活力,其活力为7.8±1.25μMpi/mg·h-1。

表12-1-7 参附注射液对大鼠心肌膜ATP酶活性的影响

　 参附注射液(ml) 0 0.1 0.3 0.4 酶的相对活力(+SE)
抑制率(%)
P值* 100
0 44.87±1.68
55.13 31.41±3.32
68.59
<0.01 12.0±0.40
88.00
<0.01

*均与0.1ml参附注射液值比较
表12-1-7结果说明:参附液对正常大鼠心肌膜ATP酶具有明显的抑制作用,抑制强度随浓度的增加而加强(P<0.01;p<0.01)。

表12-1-8 人参总皂苷、附子总碱混合液对心肌膜ATP酶活性的影响

　 对照 人参总皂苷、附子总碱混合液 Ⅰ Ⅱ 酶的相对活力(+S)
抑制率(%)
P值* 100
0 74.26±4.40
25.74
<0.025 68.54±5.14
31.64
<0.025

*均与相应浓度参附液(0.1ml及0.3ml)值比较
结果表明:人参总皂苷、附子总碱混合液对心肌膜ATP酶虽有抑制作用,但抑制强度较参附液明显减弱(P<0.05;P<0.05)。提示参附注射液可能具有不同程度的正性肌力作用。
1.2 对心肌缺血的保护作用^[9]
用麻醉狗心外膜电图标测法来估测心肌缺血程度和范围及参附的作用
方法:取体重12～25kg的健康杂种狗,雌雄不拘,戊巴比妥钠(30mg/kg)静注麻醉。打开胸腔暴露心脏,分离和结扎左冠状动脉前降支(LAD),并描记心外膜电图。选择10个标测点,第1～9点均位于或邻近LAD结扎点以下的分支所支配的区域(缺血区和边缘区),第10点作为非缺血区的正常对照点。描记LAD结扎前、结扎后即刻、3、5、10和15min各标测点的心外膜电图,LAD结扎15min后松解灌流1h,再进行第二次LAD的结扎。参附组与对照组试验顺序按随机法进行。参附注射液按0.2ml/kg静滴给药30min,而后开始结扎LAD,对照组给等体积等时间的生理盐水。实验以ST段抬高≥2mV或下降>1 mV为阳性点,进行各时刻ST段变化的总点数(NST↑↓)和总毫伏数(∑ST↑↓)的统计处理。以NST↑↓估测心肌缺血范围,以∑ST↑↓估测心肌缺血程度。
结果:给参附注射液后,可明显减少心肌缺血后5min以内ST段抬高(≥2mV)或降低(>1mV)的总点数NST↑↓和总毫伏数∑ST↑↓。而心肌缺血后10～15 min的NST↑↓和∑ST↑↓减少不甚明显,见表12-1-9。

表12-1-9 参附注射液对狗LAD结扎后NST↑↓和ΣST↑↓的影响

　　 结扎前
(±s) 结扎后(±s) 即刻 3min 5min 10min 15min NST↑↓ 对照组(9)
参附组(10) 3.3±3.0
2.6±2.0 8.0±1.0
5.0±2.0** 8.0±1.0
6.0±3.0** 8.0±1.0
6.0±2.0* 8.0±1.0
7.0±2.0 8.0±1.0
3.0±3.0 ∑ST↑↓ 对照组(9)
参附组(10) 8.5±6.7
8.5±6.8 45.8±24.4
19.6±7.3** 56.1±16.5
27.8±18.3** 59.4±17.9
34.6±23.5* 53.3±17.2
44.1±31.4 55.7±20.9
53.2±42.5

与对照组比:*P<0.05;**P<0.01。
给参附注射液后,可轻度降低血压和心率,因而使时间一张力指数明显降低。由给药前的152.4±37.4(±s)降至118.6±25.1,P<0.05。
1.3 对心肌梗死的影响
用重量法测定结扎大鼠左冠状动脉主干后的心肌梗死范围(IS)观察参附注射液对IS的影响
方法:选用230～320g雌性Wastar大鼠随机分为两组(参附组和生理盐水对照组)。在乙醚浅麻醉下,仰卧位从左侧第4～5肋间切开皮肤后,用弯头止血钳插入胸腔并撑开肋骨,左手姆指和食指压挤右胸及膈下方,迫使心脏跳出胸外。大多数情况下心包已被剥脱。以心表面静脉为标志,选用冠状动脉分布为均衡型和左优势型的鼠心。翻开左心耳,并在其下面与肺动脉圆锥之间(相当于左冠状动脉主干起始处2～3mm处)用00号丝线迅速结扎冠脉,并立即送还心脏,关胸前挤出胸腔内的气体。多数动物在关胸后施行几次人工呼吸,就可恢复自主呼吸。手术结束后立即腹腔注射药物(参附或生理盐水,3ml/(kg·次),每日2次),共给药4次。
术后2日,开胸取出心脏,剪去房室沟以上部分,立即放入冰箱冰冻。待结冰后用多片刀(切片间隔1.5 mm)切成7～8块心肌片,然后用1%T.T.C.(2,3,5-氯化三苯四唑)磷酸缓冲液在37℃水浴上染色5min,而后将未梗死心肌(红色)和已硬死心肌(白色)分别剪开并称重。计算梗死心肌占整个心室肌重量的百分比,以此标志IS,并观测参附对IS影响的程度。
结果13只大鼠,除对照组有1只在术后24h内死亡外,参附组无1只死亡。给药组与对照组的大鼠活动情况无明显差别,只是手术后参附组复苏较快。参附组的IS为34.9±3.2%(±s),而对照组的IS为40.5±4.9%(±s)。两组比较P<0.05,说明参附可明显缩小IS。以上可能是参附汤或参附注射液在临床上治疗急性心肌梗死所致的心衰或心源性休克有一定效果的机制之一^[9]。
牟氏[10]实验证实参附汤对家兔实验性心肌缺血也有疗效。用参附液(每1 ml含相当人参和附子各1 g)35mg、50mg、70mg/kg体重,均能显著对抗垂体后叶素引起大鼠急性心肌缺血的心电图ST段下移,其中以35mg/kg的效果最明显。在给药前,各组大鼠心律失常的发生率均在70%以上,且持续时间长而严重。给药后,发生率显著下降为25%,且表现轻而持续时间短^[11]。
1.4 对心肌力学的影响
用人参注射液、附子注射液及参附液测定麻醉犬的Vpm、LVSP(左室内压峰值)、HR(心率)、P-R间期等指标,有改善心肌力学作用[12]。戊巴比妥钠引起急性心衰的豚鼠,静脉给参附液每分钟1ml/kg,每1ml相当人参、附子生药各0.5g。1min后,左心室压升高117%,其上升最高速率增加347%。3min后,平均动脉压升高90%,其中4只出现T波倒置或(及)J点提高,给药后有3只转为正常。对于离体大鼠乏氧所致心衰的参附液可使发生时间后移,心缩幅度增加44.4%。且参附液较单味(人参或附子)有更明显的效果,说明两药之间有协同作用^[13]。
1.5 对冠脉流量及血管灌注量的影响
本药具有增加冠脉血流量及血管灌注量的作用。离体兔心灌流实验表明,给予本药后,冠脉流量即刻增加54.7±7.9%(P<0.001)。兔耳增加流量9.7±1.5%。人参即刻增加冠脉流量36%,附子即刻增加21%,说明单味药作用较配伍运用效果差。还能增加大鼠后肢血灌流量10.2±5.2%,作用维持10min以上^[12]。对正常离体大鼠心脏冠脉血流量本药可增加24%附子增加11%。对于乏氧致衰的心脏可使冠脉血流量增加14.3±2.6%(P<0.01)。心率减少8.3±2.6%(P<0.05),使心衰发生时间后移,心收缩幅度增加44.4±11.2%(P<0.05) ^[13]。
离体兔心灌流实验表明,以0.03ml/30s给药后,冠脉流量即刻明显增加,心率略有减少,心缩幅度在即刻略为减小后10min内增加8.0±5.3%。与人参注射液、附子注射液相比,增加冠流作用最为明显且持续时间亦较长。以0.02ml/30s注射给药进行离体兔耳灌流实验,参附液增加流量9.7%,人参注射液增加7.9%,附子注射液仅增加2.3%。大鼠后肢灌流实验也证实,给予参附液后流量增加10.2%,人参注射液增加9.7%;附子注射液增加4.7%^[14]。
1.6 对心肌细胞电生理特性的影响
用16只在体兔心室肌细胞和11份离体心肌组织灌流,静脉注射2ml参附液(每1ml相当于红参0.1g,附片0.2g)或灌流液中加入5%参附液,心率、APH、APD100、APD50均无明显影响;但能增加动作电位0相最大去极化速率,在体法由给药前的335±60V/S增加到403±70V/S;离体法由给药前的435±34V/S增加到513±27V/S。给药后有效不应期延长为125±9ms^[15]。
1.7 对哇巴因心脏毒性作用的影响^[16]
1.7.1 在体麻醉豚鼠试验
选用体重300～350g豚鼠,雌雄兼用,乌拉坦麻醉后恒速静注哇巴因(9μg/min,并监测Ⅱ导联心电图。将动物随机分为两组,哇巴因对照组(n=7):静脉注射生理盐水2ml/kg后恒速静注哇巴因直至死亡。参附注射液组(n=7):静注参附注射液2ml/(kg·30s)后再给哇巴因直至死亡。各组分别记录开始出现室性早搏(VEB),室性心动过速(VT),心室颤动(VF)和死亡时的哇巴因用量。两组比较,t检验法进行显著性检验。
静注哇巴因(μg/kg)269.7±21.5时出现VEB,327.7±16.7时出现VT,380.2±12.5时出现VF,419.7±19.4时死亡。预先静注参附注射液〔2ml/(kg·30s)〕可使哇巴因致VEB、VT、VF和死亡时的用量分别增至316.8±16.6(P<0.01),371.8±27.9(P<0.01),420.9±39.2(P<0.05),456.9±37.9(P<0.05)。
1.7.2 离体豚鼠心脏灌流
豚鼠体重250～300g,雌雄兼用。按照Langendoff氏方法制备离体灌流心脏。Krebs-Henseleit氏灌流液用95%O2和5%CO2饱和,pH7.4,温度34℃。在近房室结处置一电极,应用DCQ2型电子刺激器起搏,将心率控制在180次/min。心尖处剪一洞并给予2g的静息张力。心尖连接一拉力换能器,连续观察心脏等容收缩力及静息张力的变化。实验分为:对照组(n=5);哇巴因组(n=7),Krebs氏液灌流20min后换哇巴因(1μm)灌流液;参附注射液十哇巴因组(n=7),Krebs氏液灌流20min后换参附注射液(终浓度1%)十哇巴因(1μm)混合灌流液,各组均记录心脏收缩幅度及静息张力的变化,并与哇巴因组比较,用t检验进行显著性检验。
灌流哇巴因(1μm)20min后心脏收缩幅度显著降低,参附注射液(终浓度1%)加1μm哇巴因灌流时明显推迟心脏收缩幅度降低出现的时间,并可减轻心肌收缩力降低的程度(P<0.01);1μm哇巴因灌流心脏10min后到40min可明显升高心肌静息张力,参附注射液加1μm哇巴因灌流时,心肌静息张力的升高明显低于哇巴因组(P<0.01);收缩幅度降低50%的时间和静息张力升高50%时的时间均推迟了15min。
1.7.3 对心肌Na+,K+-ATP酶活性的影响
豚鼠心肌Na+,K+-ATP酶活性按照Hendle氏方法测定,其活性以μm pi/mg prot./h表示。1μm哇巴因几乎完全抑制豚鼠心肌Na+,K+-ATP酶活性,而参附注射液(终浓度1%)对该酶活性没有影响。
哇巴因对豚鼠心脏可诱发VEB、VT、VF等心律失常,参附注射液可明显提高哇巴因致各种心律失常和死亡时的用量;哇巴因(1μm)引起短阵的正性肌力反应后继之以收缩力持续性降低,静息张力逐渐升高。参附注射液可明显减轻上述毒性反应。心肌缺血、缺氧等是造成洋地黄中毒的主要易患因素。参附注射液有扩张冠脉,增加心肌血流量,降低心肌细胞耗氧量,保护缺血心肌,缩小心肌梗死范围等作用。鉴于该注射液对心肌的上述有益作用,又可保护性的减缓哇巴因引起的心脏毒性反应,故认为参附注射液在临床上如用于预防和治疗洋地黄类药物中毒可能有一定效果^[16]。
1.8 抗心律失常作用
参附液(每1ml含相当红参和黑附片生药各1g)对乌头碱致大鼠室性或室上性心律失常、传导阻滞、室性心律等的有效率可达87.5%,与生理盐水组比较,差异显著;而附子注射液为75.0%,人参注射液约9.0%。实验中参附液有时很小剂量也能对抗室性或室上性心律失常,使心率明显减慢,说明本药液可能具有降低异位节律点,改善传导性能、改善房室间及心室的传导等作用^[14]。随参附液用量的增加,氯仿所致小鼠室颤率呈下降趋势,与对照组比较,差异显著^[13]。
2.抗休克作用
孙氏等为了进一步探讨参附青注射液(人参、附子、加青皮)抗内毒素休克机制,采用大肠杆菌内毒素复制大鼠休克病理模型,观察参附青对大鼠内毒素血症血浆前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)的稳定代谢产物6-keto-PGF1a、TXB2以及cAMP、cGMP的影响。
方法:50只大鼠随机分成5组、每组10只动物,麻醉后手术分离颈外静脉、颈动脉待用。正常对照组:动物麻醉后,经1.5h后处死取血。不注射任何药物,作为正常对照。预防组:又分为参附青预防组:动物先从颈外静脉滴注参附青3ml,于1h滴完。然后注入大肠杆菌内毒素4mg/kg(体重)。30min后处死动物取血。生理盐水预防对照组:先从颈外静脉滴注3ml生理盐水,其他与正常对照组相同。治疗组:也分为参附青治疗组:先注入大肠杆菌内毒素,10min后滴注参附青3ml于1h内滴完,处死动物取血。生理盐水治疗对照组:动物注入内毒素后10min,滴注等量生理盐水,其他步骤同参附青治疗组。
用硅化针筒试管取大量颈动脉血2ml。以3000r离心20min取血浆。按RIA方法,在LKBr计数器上测出各管的放射性强度(CPM),按回归方程:y=a+b·logx计算出TXB2、6-Keto-PGF1 α、cAMP、cGMP的浓度。结果见表12-1-10,表12-1-11,表12-1-12。

表12-1-10 参附青预防滴注对大鼠血浆6-Keto-PGF1α、TXB2及其比值的影响(±)

分 组 n 6-Kete-PGF1α(pg/ml) TXB2(pg/ml) TXB2/6-Keto-PGF1α 正常对照组
参附青预防组
生理盐水预防组 10
10
10 89.6±8.9
93.5±9.6**
37.6±6.2△△ 792.7±70.1
983±88.2
1029.5±87.0△ 10.5±2.0
12.2±2.0**
34.1±6.6△△

与生理盐水预防组相比:* *P<0.01,与正常对照组相比:△P<0.05,△△P<0.01

表12-1-11 参附青治疗对大鼠血浆6-Keto-PGF1α、TXB2及其比值的影响(x±s)

分 组 n 6-Kete-PGF1α(pg/ml) TXB2(pg/ml) TXB2/6-Keto-PGF1α 正常对照组
参附青预防组
生理盐水预防组 10
10
10 89.6±8.9
263.6±9.1**
33.8±6.62△△ 792.7±70.1
975.1±78.8
1083.8±112.3△ 10.5±2.0
3.7±0.80**
40.4±7.7△△

与生理盐水预防组相比:* * P<0.01,与正常对照组相比:△P<0.05,△△P<0.01

表12-1-12 各组大鼠血浆cAMP、cGMP浓度(x±s)

　 n cAMP(pg/ml) cGMP(pg/ml) 正常对照组
参附青预防组
生理盐水预防组
参附青治疗组
生理盐水治疗组 10
10
10
10
10 5.40±0.61
5.48±0.61**
2.85±0.25△△
7.63±0.95**
1.37±0.27△△ 2.82±0.82
3.13±0.73
3.83±0.55
3.43±0.32
2.40±0.41

与生理盐水预防组相比:* * P<0.01,与正常对照组相比:△△P<0.01
表2-1-10结果显示:正常大鼠血浆6-Keto-PGF1α含量为89.6±8.9pg/ml,而TXB2为792.7±70.1pg/ml,TXB2/6-Keto-PGF1a比值为10.5±2.0。大鼠经参附青预防滴注后注射内毒素,可使6-Keto-PGF1α和TXB2含量基本稳定在正常水平。生理盐水预防对照组TXB2含量明显升高(P<0.05),6-Keto-PGF1α显著下降,TXB2/6-Keto-PGF1α比值增大(P<0.01)。
表12-1-11显示:用参附青治疗大鼠内毒素血症可显著升高血浆6-Keto-PGF1a含量,与生理盐水治疗对照组比较,差别极为显著(P<0.01)。但对TXB2作用稍差,两组之间无显著差别。参附青治疗组的TXB2/6-Keto-PGF1α比值显著小于对照生理盐水治疗组,差别有极显著意义(P<0.01)。
表12-1-12证明:大鼠内毒素血症血浆cAMP含量比正常动物明显降低,应用参附青防治,其血浆cAMP含量都明显上升,与生理盐水对照组相比,差别极为显著(P<0.01)。但对cGMP影响不大,无论与正常大鼠或生理盐水对照组相比,差别均无统计学意义。
本实验提示:大鼠注射内毒素可以引起血浆PGI2-TXA2平衡失调(TXA2升高,PGI2降低)。如用参附青预先滴注,可保持正常范围内的动态平衡。用参附青治疗大鼠内毒素血症,则可非常显著地提高血浆PGI2含量,同时抑制TXA2的升高。
大鼠内毒素血症早期,用生理盐水防治,血浆6-Keto-PGF1α均降低,需经参附青预防或治疗后,才会升高。与一些文献报道注射内毒素后PGI2升高结果不同,需要进一步探索。于大鼠注射内毒素后,不仅明显降低血浆PGI2的含量,在与血浆环核苷酸同步观察中还发现,环腺苷酸(cAMP)含量亦降低。这些变化,用参附青防治,可同时提高PGI2、cAMP水平。参附青对内毒素血症大鼠血管内皮细胞有明显保护作用。血管内皮细胞是机体产生PGI2的主要场所。内皮细胞受到保护、再生增加,这就加强了机体的自我保护能力。
对于股动脉放血后失血性休克的家兔,使血压降至5.33kPa,静滴给药后,可使血压回升。回升达最高值所需时间为33±10.2min,平均维持时间为29.2±6.2min。而对照组血压虽有升高,但很快就下降,平均维持时间为16.7±3.6min。本方能显著降低休克动物乳酸和血浆组织蛋白酶活性(PCA)水平。若以休克20min时的乳酸和PCA水平为100%,给予本药3h后,乳酸含量下降为87.5%,而对照组却上升为133.8%,PCA下降为73.2%,对照组上升为24.4%。给药后血乳酸和PCA下降水平与对照组比较,差异显著(P<0.05)。乳酸和PCA水平随着动物休克时间延长而升高,死亡也随之增加。而本药能明显降低休克动物乳酸和PCA水平,比对照组显著延长[18]。实验发现,用参附代血浆给狗进行换血,在不回输自家血的条件下,当换血至500～1000ml时,对照组中用6%羟乙基淀粉组实验狗的血压下降8 kPa,低分子右旋糖酐组下降7.2kPa,而用参附代血浆组仅下降4.8 kPa。当换血至细胞比积在10%以下时,本方药组狗的死亡率为40%,6%羟乙基淀粉组为75%,低分子右旋糖酐组为100%。另本方药组PaO2较羟乙基淀粉对照组显著升高[19]。对家兔失血性休克实验中,本药组静注药后,血压平稳上升,脉压差,呼吸均得以改善,升压维持时间达3h以上。另参附柴液能提高感染性休克犬存活率,抑制DIC发展和稳定细胞膜。将麻醉犬舌静脉注射O111B4型活大肠杆菌5×109个/kg,造成感染性休克合并DIC。在注射菌液前0.5h,注射菌液后3、6h,西药组静脉注射地塞米松150mg/kg,中药组静脉注射参附柴液1ml/kg(每毫升含红参200mg,熟附子50mg,北柴胡80mg)。在注射菌液后3、6h两组皆静脉注射庆大毒素,盐水对照组注射等量生理盐水。结果与盐水组比较,中、西药组动物存活率显著提高(P<0.05,<0.01)。平均动脉压、血浆纤维蛋白原降低较慢(P<0.05,<0.01)。β-葡萄糖醛酸酶、抗凝血酶Ⅲ活性改变较小(P<0.05～0.01)^[20]。夏氏等^[21]报道了生脉、参附注射液对家兔休克复苏时血流动力学的对比研究。
3.对其他脏器缺血损伤的保护作用
3.1 对脊髓缺血损伤的保护作用^[22]
18只雄性新西兰家兔,随机分为3组,保护组、治疗组、对照组。保护组和治疗组分别于缺血前30min内或再灌注30 min内持续恒速静脉输入参附注射液10 ml/kg;采用肾下主动脉阻断法造成脊髓缺血(20min);术后观察神经功能变化并记录1、4、8、12、24和48h神经功能评分,48h处死动物后取脊髓(L5～7)标本进行病理观察。结果:术后神经功能评分各时间点保护组和治疗组均明显多于对照组(P<0.05),保护组和治疗组间则无差异;再灌注48h脊髓前角正常运动神经元计数,保护组和治疗组均高于对照组(P<0.05),保护组、治疗组间无差异。实验显示参附注射液对脊髓缺血性损伤有明显的保护和治疗作用。
3.2 对肾缺血的保护
戴氏等[23]观察了参附注射液对肾缺血再灌注模型超氧化物歧化酶(SOD)及组织形态的影响。结果显示与缺血再灌注组相比,参附液组肾外髓水肿明显减轻(P<0.01),SOD活性明显增高(P<0.01),提示保护SOD活性,降低脂质过氧反应的作用是参附抗休克的机制之一。
阻断麻醉兔双侧血管造成肾缺血,然后再灌注。于缺血前及灌注后静注30%参附液3.0ml/kg体重。结果肾缺血的第1、3、5、7d参附组尿素氮(BUN)和Bcr值的升高明显低于对照组,Bcr的恢复也较其为快。提示参附组肾功能损伤程度较轻,恢复速度较快,肾组织形态学改变亦较对照组为轻,说明对兔肾缺血有保护作用^[24]。与参附液有防治甘油引起的大鼠ATN的作用相一致^[25]。
3.3 对缺血多脏器损伤的保护作用
家兔18只,采用失血性休克模型,随机分为3组,检测多脏器组织中SOD、MDA、TNF含量及血浆酸性磷酸酶(ACP)、镁浓度,小肠组织作透射电镜观察。结果再灌注90min后参附注射液治疗组肝、肾、肺、肠组织中的MDA和TNF水平低于对照组,SOD水平则高于对照组,血ACP、Mg2+浓度治疗组低于对照组。电镜观察,肠粘膜上皮细胞损伤参附组不明显[26]。
应用参附注射液和柴胡注射液在小鼠急性心肌缺血模型上观察小鼠血清中SOD活性的变化及心肌组织中丙二醛(MDA)含量变化。结果表明:缺血组与给药组相比,血清中SOD活性下降(P<0.05)。心肌组织中MDA含量增高(P<0.01)。提示两种制剂联合应用具有抗脂质过氧化作用^[27]。
范氏等^[28]实验观察了参附液和柴胡液体外对小鼠肝匀浆MDA和H2O2作用后兔血浆MDA、血浆游离血红蛋(PHb)的影响。结果两药都能明显抑制肝匀浆MDA的生成和H2O2引起的血浆MDA、PHb升高,随着药物剂量增加,抑制作用加强。两药合用抑制作用更强。说明两药有抗脂质过氧化作用。
刘氏等实验证明人参、附子、黄芪及其组方对大鼠肝匀浆过氧化脂质生成也有一定的影响^[29]。
4.对血小板聚集及血液流变性的影响
本药具有显著的对抗ADP诱导血小板聚集作用。用药后15min开始起作用,持续10h以上,对血小板聚集的抑制率为:15min为33.7%,30min为33.8%,60min为37.3%,说明本药是一种起效快、持续时间长,作用较强的抗血小板聚集药^[30]。给正常家兔静注本药100mg/kg后15、30、60min时,可使血细胞压积较给药前降低3.8%、4.9%、6.8%,全血比粘度降低8.7%、10.85%、15.4%,血浆比粘度降低3.8%、4.5%、5.7%,三者P<0.01。红细胞电泳时间给本药后显著加快。红细胞聚集率降低31.0%、30.5%、59.7%,均有非常显著差异。同时对血浆总胆固醇,由给药前40.8±1.54降到13.52±0.31mg%(P<0.01),三酰甘油由62.61±3.33降至46.29±2.64mg%(P<0.01),纤维蛋白原由147±1.3降至103±1.8mg%(P<0.01)。其作用比等毒性的丹参注射液为强^[31]。
5.对免疫功能的影响
称取人参30g,附子15g,先后加蒸馏水1000和500ml煮沸2、1.5h,合并两次药液,过滤,水浴蒸发至100ml。另按同法煎制1g/ml人参和1g/ml附子二种药液。
小鼠灌服给药,对照组给水,每次0.6ml,每日2次,连续7d。将小鼠颈椎脱臼处死,进行中药诱导的IL-2上清液、ConA活化的小鼠脾淋巴细胞制备,测定IL-2活性。结果见表12-1-13,表12-1-14。

表12-1-13 人参、附子与参附汤对小鼠脾淋巴细胞产生IL-2的影响

　 动物数(只) cpm范围 (±s) P值 GI范围 (±s) P值 对照组 7 191-779 515±234　 1.09-4.33 2.86±1.31　 人参组
附子组
参附汤组 8
8
8 615-2260
1395-2814
922-1634 1236±512
1911±573
1206±241 <0.005
<0.001
<0.001 3.42-12.56
7.75-15.63
5.12-8.22 6.87±2.84
10.62±3.18
6.70±1.34 <0.005
<0.001
<0.001

注:IL-2上清液均作1/8稀释;人参和附子的浓度均为1g/ml
从表12-1-13结果可见,人参组、附子组与参附汤组无论cpm或GI均显著高于对照组(P<0.005-0.001)。提示参附汤及其单味人参、附子三者均有显著促进小鼠脾淋巴细胞产生IL-2的作用。

表12-1-14 人参、附子与参附汤对小鼠混合脾淋巴细胞产生IL-2的影响

　 cpm范围 (±s) P值 GI范围 (±s) P值 对照组 173-1180 613±566　 0.96-6.56 4.46±2.46　 人参组
附子组
参附汤组 1146-1407
832-1384
1078-1327 1285±130
1156±243
1209±142 <0.05
<0.2>0.05
<0.1>0.05 6.36-7.82
4.62-7.69
5.99-7.42 7.14±0.73
6.42±1.35
6.70±0.81 <0.1>0.05
<0.2>0.05
<0.2>0.05

注:IL-2上清液均作1/2～1/16稀释;人参和附子的浓度均为1g/ml
表12-1-14结果表明人参组、附子组与参附汤组无论cpm或GI均显著或明显高于对照组水平,与对照组相比,有显著(P<0.05)或接近显著差异(P<0.2～0.1>0.05),提示参附汤及其单味中药人参与附子有显著或明显促进小鼠混合脾淋巴细胞产生IL-2的作用。该结果与表12-1-13相似。观察结果表明参附汤及其单味方药人参与附子均能显著刺激小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2,无论用cpm或GI表达,结果基本一致。故提示参附汤有通过刺激IL-2分泌参与机体免疫反应调控的作用[32]。参附汤以人参与附子配伍,二者药量为2:1,虽皆能刺激IL-2分泌,但未呈相加作用。附子含有毒性很强的双酯类生物碱,与人参配伍亦未见拮抗作用。提示该方剂组成的科学性与药量的合理性。
参附汤的100%煎剂和水煎醇提液对淋巴细胞转化率为28.31%和48.62%。在活性花斑试验中,花斑形成率分别为61%和47%,均高于对照组[33]。说明本药具有增强细胞免疫的作用。体外实验表明,参附汤除能明显提高淋巴细胞转化率,促进活性花斑形成率外,并能抑制白细胞游走及促进产生溶血空斑。表明本药能够刺激细胞免疫及抗体生成反应^[34]。
6.对糖皮质激素受体(GcR)的保护作用[35]
药物制备:参附汤由人参、附子(3:1)组成。失血性休克模型:在氯胺酮麻醉下,沿大鼠正中线剪开颈部皮肤及皮下组织,钝性分离颈前肌群至气管,在气管左侧找到颈动脉,远端结扎,近心端上动脉夹,剪一小口,插管,妥善固定。移去动脉夹放血。放血量为总血量的20%,均在1min内放完。
给药方法:模拟参附汤的临床给药方式,失血性休克大鼠分别于放血前30min、放血后4、8h及动物处死前30min由胃管注入参附汤1ml;对照组均灌以等量的生理盐水。
动物处死:为避免昼夜节律对激素分泌及其受体的影响,各组动物按预先设置的实验程序完成后,均在固定时间快速断头处死,以免动物挣扎,取所需组织测定。大鼠血浆糖皮质激素(Gc)和肝胞液GcR结合活性影响,见表12-1-15。失血性休克大鼠血浆皮质酮含量明显高于相应正常对照组,肝胞液GcR水平则明显低于正常对照组。参附汤对相应模型运动血浆皮质酮的异常增高,无下调作用,但对肝胞液GcR水平有明显的上升作用,实验中用药组大鼠肝胞液GcR水平的下降幅度低于单纯模型组,且差异有统计学意义。

表12-1-15 参附汤对失血性休克大鼠血浆Gc和肝胞液GcR结合活性的影响(±s)

组 别 鼠数 Gc(mg/L) GcR(foml/mg) 正常对照
失血性休克
失血性休克加参附汤 8
8
8 35.40±9.80
119.69±35.61*
134.20±33.72** 936±294
483±156**
634±215**△

注:与正常对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与失血休克组比较,△P<0.05
研究结果提示参附汤使失血性休克大鼠肝胞液急剧下降的GcR水平明显升高。在应激时,血浆Gc升高通过对GcR的下调作用(Down-regulation)可使GcR减少,相反地,当血浆Gc下降时,它可使GcR增加。而参附汤组大鼠血浆皮质酮水平不仅没有下降,反而略有上升趋势。可见它们不是通过Down-regulation的途径来提高GcR的。
7.对甲状腺功能减退症大鼠的病理形态学的影响^[36]
取Wistar大鼠18只,体重为100～140g。按性别、体重、体温和耗氧量基本均衡的要求,将动物分为3组:对照5只(雌2、雄3),肾阳虚6只(雌雄各半),治疗组(肾阳虚治疗)7只(雌4,雄3)。在同一条件下饲养,对照组饮用自来水;肾阳虚及治疗组饮用0.04%他巴唑水,68d后对3组进行体重、体温、耗氧测定后,治疗组每只大鼠以1mg/(100g·d)的剂量灌服参附汤1次(1ml含生药红参0.4g,黑附子0.3g),连续15d,与前2组同时测量体重、体温和耗氧量后,分批分期处死,立即剖解,进行外观检查,并切取各器官组织块,置10%中性甲醛固定,石蜡包埋、切片,苏木素—伊红染色,光镜观察。
正常对照大鼠被毛紧贴皮肤,密有光泽;眼睛明亮,粉红色;鼻唇洁净湿润,淡红;尾巴粗圆色粉红,腰背平直而活泼。肾阳虚大鼠被毛蓬竖,精神萎靡、团缩,食量减少,嗜睡少动,身材矮小,治疗组大鼠嗜睡少动,团缩等现象不太明显,食量亦较肾阳虚组为大。

表12-1-16 参附汤对阳虚大鼠体重、体温、耗氧量的影响(x±s)

组别 例数 体重(g) 体温(℃) 耗氧量(ml/100g/10s) 对照组
肾阳虚组
参附汤组 5
6
7 317.8±20.8
203.3±16.1△△
203.1±12.9△ 38.4±0.1
37.9±0.4
38.3±0.3 14.7±1.1
10.2±0.7△
14.5±2.2*

注:表中肾阳虚组或参附汤组与对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01,;肾阳虚与参附汤组比较,* P<0.05
表12-1-16显示,肾阳虚与治疗组大鼠体重下降,两组间无明显差异,体温肾阳虚组较低,但3组间无明显差异。耗氧量以肾阳虚组最低,与治疗组对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。
解剖所见,肾阳虚和参附汤组大鼠,各器官体积缩小,重量减轻,胸腺萎缩;肾阳虚组心脏处于舒张状态,呈球形扩大;参附汤组为收缩状态,扩大不明显。甲状腺占体重重量的百分比,对照组为0.02±0.009g,肾阳虚组为0.07±0.003g,参附汤组为0.06±0.008g,后两组与前组对比,差异皆有高度显著性(P<0.001,P<0.01)。肾上腺占体重重量的百分比,对照组为0.02±0.002g,肾阳虚为0.04±0.002g,参附汤组为0.07±0.01g,后两组与前组比较,差异均有高度显著性(P<0.01);后两组之间比较,其差异亦有显著性(P<0.05)。
组织学观察
甲状腺:肾阳虚、参附汤组大鼠,组织呈弥漫增生,滤泡变小,泡腔内类胶质极度稀薄或消失;上皮为高柱状,部分增生突进腔内形成乳头体;间质变小,血管扩张充血,对照组大鼠腺体滤泡上皮为立方状或扁平状;泡腔内充满类胶质,边缘整齐。

表12-1-17 各组大鼠甲状腺滤泡变化的比较(x±s)

组别 例数 滤泡大小的平均直径(mm) 滤泡上皮的平均厚度(mm) 对照组
肾阳虚组
治疗组 5
6
7 0.155±0.008
0.106±0.007△△
0.125±0.008△△ 4.2±0.1
11.4±0.4△△
9.3±0.3△△**

注:在显微镜400倍下,抽取大、中、小滤泡各5个,测出其平均直径2;同时测量上、左、下、右四处上皮厚度,求出平均厚度。肾阳虚组或参附汤组与对照组比较:△△P<0.01,肾阳虚与治疗组比较:* * P<0.01
从表12-1-17看出,滤泡大小的平均直径及上皮厚度,肾阳虚、参附汤参附汤组与对照组比较,其间的差异皆有高度显著性(P<0.01)。肾阳虚与参附汤组在滤泡上皮厚度间差异亦呈高度显著性(P<0.01)。
肾上腺:对照组大鼠肾上腺皮质各带分界清晰;参附汤组各带分界模糊,束状带细胞增大,类脂质增加;肾阳虚与对照组比较,有明显差异。
睾丸:曲细精管的平均直径,对照组为0.134mm;肾阳虚组为0.102mm;参附汤组为0.106mm。肾阳虚组曲细精管各层生精细胞明显减少,精子瘦小而细长,数量减少;甚至上皮细胞变性、萎缩,胞浆呈网状,精子缺如;间质细胞萎缩变小,间质水肿。参附汤组与肾阳虚组比较,曲细精管各层生精细胞及精子数量均有增加。
卵巢:肾阳虚及参附汤组与对照组比较,卵巢体积缩小,各期卵泡数目减少。参附汤组卵泡数目较肾阳虚组有所增加,尚能见到发育较为正常的生长卵泡。
脑垂体:肾阳虚与对照组比较,前者垂体前叶兼色细胞明显增多,细胞增大,胞浆内见有大小不等的空泡,间质血管扩张充血。参附汤组与肾阳虚组相比,前者兼色细胞的数量及病变程度均有改善。
心脏:肾阳虚组大鼠的主要病理变化为:心肌纤维呈灶状纹理消失,肌细胞肿胀,见有空泡变及点、灶状坏死;间质有少量炎细胞浸润;部分病例见心内膜有间质纤维化。这些变化在参附汤组中均有明显减轻。
肺:三组大鼠均患有不同程度的间质性肺炎,各组间无明显差异。
肝:肾阳虚组大鼠肝细胞多肿胀、增大,胞浆疏松透亮呈空泡状,肝窦狭窄,参附汤组与之比较病变程度较轻。
胸腺:肾阳虚组大鼠胸腺小叶的皮髓质分界不清,皮质内淋巴细胞数量减少,网织细胞增生,部分呈梭形,并见有少量多核巨细胞;髓质内胸腺小体相对增多,多变性;小叶内及叶间纤维组织增生,并有单核细胞,嗜酸性和中性粒细胞浸润。参附汤组与之相比,胸腺小叶皮质部淋巴细胞数量明显增多,髓质内炎症细胞浸润与胸腺小体变性的程度也较轻。
脾脏:肾阳虚大鼠与对照组比较,脾脏之淋巴组织反应活跃,白髓增大,脾小体发生中心扩大,其平均直径为0.064±0.003mm,对照组为0.042±0.003mm,前者明显增大,其差异有高度显著性(P<0.001);生发中心内充满较大淋巴母细胞,其间有丝分裂相极易见到;中央动脉周围(淋巴鞘)淋巴细胞较稀疏;红髓内中性粒细胞浸润,网织细胞增生和浆细胞增多均较显著。参附汤组大鼠与之相比,中央动脉周围淋巴细胞明显增多,红髓内中性粒细胞浸润不明显,而网织细胞增生和浆细胞增多更加明显,脾小体生发中心的扩大也更加显著,其平均直径为0.069±0.004mm。
各组大鼠之大小脑、胃、肠、肾脏及外周血细胞的分类和计数,均未见有异常改变。
实验表明参附汤对“他巴唑”造成的肾阳虚动物模型的组织细胞退行性病变、功能降低性病变具有一定的改善作用。
8.耐缺氧作用
100%参附液5ml/kg,7ml/kg,9ml/kg,稀释后腹腔注射,能明显提高小鼠耐缺氧能力,显著延长耐缺氧时间,在一定剂量范围内成正相关[11]。小鼠腹腔注射参附液、人参注射液、附子注射液各0.5mg/只,均显著延长动物常压耐缺氧时间,存活时间分别为对照组的2.4、2.9、3.2倍,耗氧速率仅为对照组的42.6%～50.5%;动物死亡后的残余氧分压也较之为低[14]。参附液和人参注射液对大鼠心肌细胞呼吸均无明显影响,附子则可使其耗氧量降低27.5%[13]。参附代血浆每只小鼠腹腔和静脉给药,也可分别延长动物常压或减压耐缺氧时间。
9.抗膈肌疲劳的作用^[37]
选用家兔12只,体重2～3kg,雌雄不限,6～7月龄,20%乌拉坦5ml/kg静脉麻醉,于颈部分离气管及双侧隔神经,气管插管,安放银丝保护电极,温石蜡油棉片保护神经。动物肛温维护37～38℃。双侧刺激(30Hz,20V,0.2ms)膈神经30min,复制膈肌疲劳(DiF);静脉注射参附注射液2ml/kg,于用药前及用药后30、60、120、180min记录跨膈压(Pdi)、膈肌肌电图(EMGdi)及膈肌诱发电位(DEP),测定最大跨膈压(Pdi max),并以Pdi/Pdimax的比值作为膈肌收缩功能指标之一。以不同频率(10、30、50、100Hz)电刺激膈神经引起Pdi的变化。以疲劳前100Hz所产生的Pdi为最大值(Pdi 100 Hz)来表示不同频率下的Pdi的变化百分率,画出频率—跨膈压曲线(F-Pdi曲线)。电刺激参数(串长4s,间隔60s,强度20V,0.2ms)。
Pdi及F-Pdi曲线变化:见表12-1-18。复制DiF后,30、50、100Hz刺激膈神经引起Pdi明显降低(P<0.01)。以复制DiF前刺激频率100 Hz产生的Pdi为100%,测出F-Pdi曲线明显下降(P<0.01)。用参附注射液(2ml/kg)后30min;Pdi显著增加,F-Pdi曲线明显上移(P<0.01)。
EMGdi和DEP的变化:见表12-1-19。复制DiF后EMGdi的Fc测定值和H/L比值均降低;DEP幅度变小,潜伏期延长。给药后上述指标测定值均有回升和复原(P<0.01)。
Pdi/Pdimax比值变化:复制DiF后Pdi/Pdi max比值明显增大,由23.33%增至34.51%,给予参附注射液后,其比值明显降低(26.43%),接近DiF前水平,说明参附注射液能提高隔肌收缩力。

表12-1-18 参附注射液对12只家兔跨膈压影响(kPa, ±s)

　 刺激频率(Hz) 10 30 50 100 DiF前
DiF
药后30min
60min 0.23±0.09
0.22±0.07
0.24±0.15
0.28±0.13 0.79±0.28
0.43±0.17
0.71±0.26**
0.74±0.31** 1.18±0.34
0.68±0.35
1.12±0.38**
1.19±0.39** 1.38±0.47
0.76±0.31
1.29±0.48**
1.33±0.45**

注:与DiF比较,* * P<0.01

表12-1-19 参附注射液对12只家兔EMGdi和DEP的影响(x±s)

　 EMGdi DEP Fc(Hz) H/L(比值) 幅度(mV) 潜伏期(ms) DiF前
DiF
药后30min
60min 118±12
93±8
113±7**
116±9** 2.63±0.51
1.88±0.45
2.59±0.55**
2.83±0.64** 15.3±4.1
8.1±2.2
11.8±3.6**
14.9±3.7** 2.75±0.25
3.50±0.33
3.02±0.25**
2.87±0.51**

注:与DiF比较,* * P<0.01
10.对吗啡依赖戒断症状、位置偏爱效应的影响
SD大鼠体重220～250g,无自然位置偏爱者,随机分配于对照组(NS)、参附汤治疗组(SFT)、丁丙诺啡治疗组(Bup)、参附汤与丁丙诺啡联合用药组(SFT+Bup)。所有大鼠按逐日递增原则,腹腔注射盐酸吗啡每日3次,由5mg/kg递增到90mg/kg,连续给药12d。于每次注射吗啡前或后3h给予与吗啡等体积生理盐水。大鼠随机分配为先给吗啡或先给生理盐水。大鼠饮水、进食自由。
设置一实验箱,其体积为(60×30×30)cm3,一面为透明玻璃,箱内中段有一30cm高的抽动隔板,将实验箱完全分成两个相同体积的小方箱。一侧小方箱除玻璃面板外,内侧各面均涂黑色,光滑底面。另一侧小方箱内面除玻璃面外均为白色,柔软毛毯底面。在建立条件反射时,大鼠注射吗啡后即随机关入固定一侧方箱,注射生理盐水时关入另一侧,历时均1h。位置偏爱试验时,试验箱隔板改为离底面高12cm,上横一(5×2)cm2的铁丝网中性平台,将大鼠放在平台上,让其可以自由进入试验箱两侧,观察15min,记录其在吗啡侧的停留时间。建立条件反射前所有的大鼠均先经此项观察,了解基线水平,剔除对某侧有自然偏好者(>500s)。分别于停用吗啡1、3、8d进行位置偏爱试验。
停用吗啡后,丁丙诺啡组大鼠腹腔注射Bup,每日同样注射3次,递减顺序为0.9,0.9,0.75,0.6,0.45,0.30,0.15,0.15(mg/kg),8d后停药,灌胃同SFT组同体积生理盐水。SFT组用参附汤加味(人参、附子、白术、陈皮、木香、延胡、酸枣仁、炙甘草)水煎剂,含生药1g/ml,予大鼠6g/kg灌胃,每日2次,共用8d,腹腔注射与Bup组同体积的生理盐水。SFT+Bup组腹腔注射、灌胃药物,而对照组腹腔注射、灌胃生理盐水,方法同上。分别于停用吗啡1,3,8d,观察大鼠自然戒断症状,历时10min,评分标准:10min中湿狗样抖动、直立、齿颤的次数直接记录累计得分。
结果:吗啡依赖大鼠戒断后,参附汤、丁丙诺啡联合治疗,可明显抑制戒断症状,但不能改善大鼠已形成的位置偏爱效应。结果见表12-1-20。

表12-1-20 吗啡依赖大鼠戒断症状及位置偏爱效应的变化(±s)

组别 n 戒断第1 d 戒断第3 d 戒断第8 d 症状累计得分 位置偏爱(s) 症状累计得分 位置偏爱(s) 症状累计得分 位置偏爱(s) NS
SFT
Bup
SFT+Bup 14
15
15
15 21.6±5.2
17.3±5.4
18.9±4.9
9.5±2.4** 659.7±36.8
652.3±34.9
647.1±42.1
660.2±41.7 40.8±7.9
28.7±6.1**
21.1±7.9**
12.8±3.6** 660.9±41.7
658.7±32.5
658.3±46.2
648.3±40.6 11.3±3.2
8.1±2.8*
7.3±2.9*
6.2±3.1** 675.4±38.6
659.4±38.5
663.9±34.4
650.7±39.8

注:与NS组比较:*P<0.05,**P<0.01
11.其他
本药对肝细胞呼吸有促进作用,能显著提高肝细胞的耗氧量,可延长肝细胞的耗氧过程。表明本药能促进细胞氧化过程,增强其代谢解毒能力,有利于乳酸的糖异生作用[39]。
实验还发现参附液能明显促进戊巴比妥钠麻醉大鼠的复苏[11]。
12.药代动力学:用多组动物,按不同的间隔时间腹腔注射参附液2次,求出不同时相下的体存百分率。据间隔时间与体存百分率、对数体存百分率作图,所得曲线出现一次明显弯折的形状,可以认为参附液腹腔注射为二室模型。约1.5h前可视为吸收相,1.5h后为消除相,消除相为一直线,符合一级动力学规律。根据体存百分率按动力学二房室模型特征公式计算出下列动力学参数。消除相速率常数Ke:0.1326h-1:中央→周边速率数K12:1.5248h-1;周边→中央速率常数K12:3.6345h-1;吸收相表观半衰期t1/2:α=0.133h;消除相表观半衰期t1/2β:7.4765h^[40]。
龚氏应用小鼠急性死亡率法对参附注射液进行了药代动力学表观参数的测定。结果表明:参附活性成分在小鼠体内的动态变化符合二室开放式模型。测得其t1/2α=0.063h,t1/2β=2.70h,分布过程相当迅速,消除则较缓慢^[41]。
【毒理研究】
急性毒性测定:按序贯法静脉注射,小鼠LD50为27g/kg,折合人参、附子各为27g/kg^[13]。另有报道为48.3g/kg。还有实验证明,本药对小鼠的LD50有昼夜节律之不同,午时是LD50的最低值,为8.30g/kg,子时为LD50的最大值,为9.862g/kg,两者比较具有明显的差异性。体内和体外溶血试验均未发现溶血现象[39]。
【临床应用】
1.治疗休克及厥脱证
许氏[42]治疗休克患者62例,总有效率达87.1%,对中、轻度患者效果更佳,对心脏功能有明显提高,从SV、CO、EF、CI均较治疗前有显著性改善(P<0.05),治疗后甲皱循环有显著改善,P<0.05或P<0.01。治疗后血压明显上升,心率有些下降,尿量增加,P<0.01。
钟氏[43]采用参附注射液治疗患者31例,总有效率93.25%,死亡率46.67%,生存率53.33%。均优于单纯多巴胺、间羟胺治疗组,P<0.05。
丁氏等[44]共收治厥脱证患者182例。全部病例均符合全国厥脱证协作组1984年制定的“厥脱证”诊断标准:a.有外感或内伤的病因(如感受湿热、温热之邪或有疫疠邪毒或七情劳伤、真心痛、怔忡、心悸频发、吐泻过剧、失血过多等);b.出现神志淡漠或烦躁不安、面色苍白或潮红或紫绀、四肢厥冷、汗出不止,气息微促或与气促息微等症状(5项中有3项即可);c.脉沉细或微细欲绝或不能触及,血压下降(收缩压小于80mmHg,脉压差小于20mmHg),有高血压者其血压低于平时血压的三分之一以上,尿少(每小时少于30ml),指压时间大于3s;d.有代谢性酸中毒或呼吸性碱中毒,或两者并存。凡具备以上a、c二条,并具备b、d条中任一条者即可诊断。
182例患者分为参附组和对照组两组,两组患者病情程度及分布情况基本一致。参附组138例,男性70例,女性68例;年龄最大89岁,最小3岁,平均49岁;内有阳气暴脱型89型,气阴两虚型49例。对照组44例,男性20例,女性24例;年龄最大86岁;最小14岁,平均47岁。两组患者的休克类型均以感染性休克为主(参附组55例,占39.88%,对照组26例,占59.09%),其余依次为失液性、失血性及心源性休克。
参附组用参附注射液,不用肾上腺皮质激素及血管活动药物,余按西医常规治疗。用法:30%参附注射液10～20ml加于5%～10%葡萄糖液或生理盐水或林格氏液20ml中静脉推注,必要时每隔0.5～1h重复1次;或以50～100ml参附注射液加入250～500ml上述液体中静滴。对照组按西医常规抗休克治疗(包括一般监护,积极有效地控制原发病因,扩容,纠酸,酌情选用血管活性药物及肾上腺皮质激素,防治并发症)。两组均于治疗前后观察神志、面色、肢冷、体温、呼吸、心率、血压(收缩压、脉压等)、汗及尿量等的变化。
疗效评定标准:用药3h血压回升,12h内厥脱改善,24h内症情稳定停药者为显效;用药后3h内血压回升,或24h内厥脱改善,或48h内症情稳定停药者为有效;用药后血压不回升,厥脱不改善,症情不稳定者为无效。厥脱改善指脉搏有力,收缩压力大于80mmHg,脉压差大于20mmHg,末梢充盈小于2s,或甲皱微循环改善,肢端回温,尿量增加,每小时大于30ml。
治疗效果:参附组138例,治疗后获显效91例(65.9%),有效32例(23.2%),无效15例(10.9%);总有效率为89.1%。对照组44例,治疗后获显效24例(54.5%);有效15例(34.1%),无效5例(11.4%);总有效率为88.6%。两组患者的总有效率无显著差异(P>0.05)。从附表中看出,两组疗效的分布均随病情的轻重程度不同而有显著差异(参附组P<0.001,对照组P<0.05),但两组相同程度病情间的疗效则无显著差异。

表12-1-21 参附注射液对不同程度病情的疗效

病情 参附组(138例) 对照组(44例) 显效 有效 无效 显效 有效 无效 轻度
中度
重度
合计 28
45
18
91 9
16
7
32 0
3
12
15 7
10
7
24 9
3
3
15 0
1
4
5

两组疗效比较:感染性休克疗效比较:参附组感染性休克病例55例,治疗后获得显效23例(41.8%),有效25例(45.5%),无效7例(12.7%);总有效率87.3%。对照组26例,治疗后获显效11例(42.3%),有效12例(46.2%),无效3例(11.5%);总有效率88.5%。两组总有效率无显著差异(P>0.05)。血压复常比较:参附组在用药1h内血压恢复正常者59例,占该组总有效例的48%;对照组于用药1h内血压恢复正常者11例,占该组总有效例的28.2%。参附组明显优于对照组(P<0.05)。主要观察指标变化:治疗后,对肢冷的改善参附显著优于对照组(P<0.05),其它指示如神志、面色、体温、呼吸、心率、汗、尿的改善,两组间无明显差异(P>0.05)。
王氏等[45]应用回阳救逆药参附注射液及参附青注射液治疗感染性休克获得满意疗效。参附青组(由红参、附子、青皮组成)43例,其中男性24例,女性19例,年龄30～86岁。参附组(红参、附子组成)21例,男性12例,女性9例,年龄14～82岁。参附青注射液组43例中感受温热之邪28例,湿热之邪12例,热毒之邪3例。参附注射液组21例中感受温热之邪6例,湿热之邪2例,热毒之邪13例。辨证分类:参附青注射液组中阳气暴脱型22例、气阴耗伤型12例,真阴衰竭型9例。参附注射液组中阳气暴脱型8例,气阴耗伤型10例,真阴衰竭型3例。分度:参附青注射液组中轻度7例,中度20例,重度16例。参附注射液组轻度7例,中度10例,重度4例。
治疗方法:二种注射液均以60～100 ml加入5%葡萄糖溶液500 ml静脉滴注,直至厥脱纠正。其他使用抗生素,或相应西药治疗,但不使用血管活性药和激素。
治疗结果:按国家中医药局厥脱急症协作组制订标准,结果见表12-1-22,表12-1-23。

表12-1-22 “参附青”与“参附”组的疗效

组 别 显效 有效 无效 有效率%　 参附青组(n=43)
参附组(n=21) 20
8 13
2 10
11 77
48 χ2=4.188
P<0.05

表12-1-23“参附青”与“参附”对厥脱分类、分度的疗效

　 参附青组(n=43) 参附组(n=21) 有效 无效　 有效 无效　 阳气暴脱
气阴耗伤
真阴衰竭 19
10
4 3
2
5 χ2=16.176
P<0.01 6
4
0 2
6
3 χ2=5.368
P>0.05 轻度
中度
重度 7
14
12 0
6
4 χ2=2.663
P>0.05 7
3
0 0
7
4 χ2=12.7
P<0.01

结果:参附青注射液组总有效率为77%,参附注射液组总有效率为48%,二组比较,P<0.05。有显著差异。二组服药后均有不同程度的升压、减慢呼吸与心率,并使神志转清,汗出而止,四肢转温,脉转有力。
参附青注射液的疗效优于参附注射液,主要表现为升压作用强,收缩压提高幅度为7.14±0.78 kPa,而参附注射液收缩压提高幅度仅为2.06±0.85 kPa。显示对重度患者疗效差。认为阳气暴脱轻症,用温阳益气的参附汤治疗有效,但阳气暴脱,气机逆乱重证,仅予补益之法,还不能使阳气运行于周身,须加行气之品,推动补益之阳气通达四肢、运于周身,使虚脱得复,厥逆得顺。
郑氏[46]用参附汤治低血压25例。血压5.33～8/0～4 kPa者4例,8～9.33/4 kPa者7例,9.33～12.5/5.33～8 kPa者14例。治法:在治疗原发病的同时将参附注射液一定剂量加入液体中静脉点滴。血压<8/4kPa者用60～80 ml;血压>8/4 kPa<10.6/6 kPa者,用40～60 ml;血压> 10.6/6 kPa< 12.5/8 kPa者用20 ml。每日6次或2次。血压<8/4 kPa者可先静推20～30 ml后再静滴,疗程12～15 d。结果:症状消失恢复正常者10例;症状消失,血压恢复到12.5/8 kPa者9例;症状改善,血压<12.5/8 kPa者3例;2例因肝硬化并消化道出血死亡。体会:此药升压作用平稳,血压能稳步上升,且能使血压长期稳定于某一水平没有较大的反复,停药后血压不至于迅速降落,尤其是心肌梗死者无需考虑能引起室壁瘤、心脏破裂等并发症。临床经验表明,参附注射对心梗后低血压症,普通低血压症、神经源性休克效果最好,胃及十二指肠溃疡出血次之,肝硬化并消化道出血疗效最差。
崔氏等[47]用参附注射液抢救低血容量休克,认为需大剂量,快速静滴,作用显著,还须配合补充血容量及综合治疗,并连续用药或与生脉注射液交替用药才能取得满意的临床疗效。
赵氏用参附注射液治疗急性心肌梗死、恶性肿瘤、药物中毒之低血压状态26例;急性心肌梗死、感染、手术或创伤等休克20例。用本药注射液40～100ml加10%葡萄糖250～500ml,缓慢静脉点滴,每日用量80～200ml,一般为1～7d,个别用10～20d。病情严重配合升压药,所治46例中40例血压复常,有效率为86.5%。临床观察发现本药液具有升压的作用,尤以对收缩压低于11.97kPa,舒张压低于7.99kPa者效果更佳,在用药后12h即可改善末稍循环。同时还可减少对升压药的依赖性,加强升压药的作用^[48],另用参附汤治感染性休克9例,方法是在抗感染的基础上,停用其他药物,均替之参附汤:红参10g,附子10g。第1d服2剂,第2d以后每天服1剂。结果9例全部治愈,最快者24h即见效^[49]。
丛氏报道用参附代血浆治疗中毒性、创伤性、失血性等各类休克50例,除2例因严重颅脑损伤抢救无效死亡外,余48例均获痊愈。对于手术失血的患者42例,静滴本药后,血压均平缓回升。用本药经治疗一般未见任何副作用^[19]。
本药为主,中西医结合抢救3例休克型肺炎住院病人,休克缓解的时间均为12～15h,且病情无反复^[50]。在参附液基础上加丹参,治疗毒蛇咬伤合并中毒性休克、胆囊炎胆石症并中毒性休克,获效^[51]。治疗休克30例,总有效率为84%。其中对低血压倾向效果最好,轻度休克次之,严重休克效果较差^[52]。用参附、参麦注射液抢救雪上一枝蒿中毒性低血压性休克1例[53]或以参附针抢救失血性休克^[54]、感染性休格克^[55]、厥脱^[56～58]、心肺复苏^[59,60]等,均获效验。
2.抗心律失常
邹氏^[61]共收治123例早搏,经用参附汤加减治疗取得较好疗效。123例均为住院病例。其中男85例,女38例;年龄最小14岁,最大75岁,平均年龄46.8岁。病情最短1个月,最长5年,平均1.3年。冠心病45例,风湿性心脏病53例,高血压性心脏病9例,心肌炎14例,原因不明者2例。辨证分型:心肾阳虚型(44例):证见心悸,气短,胸闷,肢肿,畏寒,身体倦怠,舌质淡,舌苔薄白,脉沉迟结代。气阴两虚型(35例):证见心悸,气短,失眠,自汗,盗汗,咽干烦热,舌质红少津,脉细结代。心脾两虚型(25例):证见心悸,气短,头晕,面色不华,神疲乏力,纳呆腹胀,舌质淡,脉细弱结代。气滞血瘀型(19例):证见心悸,乏力,头晕,胸背作痛,活动加剧,纳呆体倦,舌质淡,舌苔薄白,脉细结或涩而结代。心电图检验:治疗前均经心电图检查确诊。心房性过早搏动39例,房室交接处性过早搏动36例,心室性过早搏动46例。
基本方用参附汤加减:人参15～20g,制附子15～30g(先煎),炙甘草20～40g,丹参30g,郁金15g,枳壳10g,川芎10g;气阴两虚者加黄芪、五味子、生地黄、酸枣仁;血瘀痹阻胸痛较甚者加三七、薤白、檀香等;心脾两虚者加山药、茯苓、白术等;阴虚者去附子、加阿胶、何首乌、麦冬等。每天1剂。附子先煎0.5h,再放入其它药物同煎。一般用清水500ml煎取250ml左右,分2次温服。15d为1疗程。
疗效标准:参照1979年全国中西医结合防治冠心病、心绞痛、心律失常研究座谈会制定的《心律失常严重程度及疗效参考标准》进行评定。显效:临床症状消失,心脏听诊无早搏或早搏次数比原来减少,心电图正常或早搏次数比原来减60%以上。有效:临床症状改善或减轻,心脏听诊早搏降至5次/min以下,心电图复查早搏次数比原来减少50%以上。无效:自觉症状无改善,心脏听诊早搏无减少,心电图复查无改变。
治疗结果:123例中显效42例(34.1%),有效77例(62.6%),无效4例(3.3%)。总有效率为96.7%,各型治疗效果见表12-1-24,表12-1-25。

表12-1-24 参附汤加减辨证治疗早搏疗效(例)

证型 例数 显效 有效 无效 有效率(%) 心肾阳虚
气阴两虚
气滞血瘀
心脾血虚
合计 44
35
19
25
123 15
12
5
10
42 29
22
12
14
77 0
1
2
1
4 100.0
97.1
89.5
96.0
96.7

由表12-1-24可知,效果较好的为心肾阳虚型,其次为气阴两虚型,其他类型也有一定疗效。

表12-1-25 参附汤加味对各型早搏疗效(例)

类型 例数 显效 有效 无效 有效率(%) 心房性早搏
房室交接处性早搏
心室性早搏
合计 39
36
48
123 13
11
18
42 25
24
28
77 1
1
2
4 97.4
97.2
95.8
96.7

由表12-1-25可知,参附汤对各种起源的早搏均有效,而以对室性及房性早搏的疗效较好。
王氏[62]用参附注射液静脉滴注治疗频发室性早搏35例,皆为急诊病人。其中,男15例,女20例,年龄24～82岁之间,平均为47.25岁。据主诉,从发病到就诊时间间隔,最短0.5h,最长约18h。35例中,有冠状动脉硬化性心脏病史者22例、有肺源性心脏病史者8例、有频发性室性早搏家族史者3例、原因不明者2例,有频发性室性早搏反复发作史者10例。35例均以心悸不安、胸闷喘促、头晕乏力等症急性发作而就诊,或伴见汗出肢冷,或伴见胸中刺痛。血压下降或正常,舌质淡或暗,脉搏不整,心电图异常。
西医诊断标准:凡室性早搏每分钟超过6次以上者,或室性早搏与正常搏动交替出现而成二联律者,或每隔两次正常搏动出现一次早搏而成三联律者,或连续发生三个以上的室性早搏而成短阵性室性心动过速者,皆诊断为频发性室性早搏。35例心电图诊断呈二联律者5例,三联律者3例,但无短阵性室性心动过速者。中医诊断标准:以心悸不安、胸闷喘促、头晕乏力为主症,若兼汗出肢冷、倦怠懒言,舌淡苔白,脉沉或微弱而结代,则为心肾阳虚;若兼胸中刺痛,舌质暗或有瘀点、瘀斑,舌下静脉瘀暗,脉涩而结代者,则为血脉瘀阻;若动则悸重,静则稍安,兼气短力怯,面白,舌淡红,苔薄白,脉细弱而结代者,则为心气不足。35例中心肾阳虚者16例;血脉瘀阻者14例;心气不足者5例。
将参附注射液50ml兑入5%葡萄糖注射液500ml或生理盐水注射液500ml中,以每分钟45～60滴的速度,给患者静脉滴注。同时用心电监护仪监测心律变化,复查心电图。
疗效判定标准临床痊愈:用药10min后室性早搏次数开始减少,用药90min内,室性早搏消失,自觉症状全部消除,随访1年无复发。显效:用药30min后室性早搏次数开始减少,用药120min内室性早搏消失,自觉症状消除,随访1年偶有复发,再用参附注射液仍可缓解。有效:用药40min后室性早搏次数开始减少,150 min内室性早搏基本消失或偶发,自觉症状基本消除,随访1年有两次以上发作。无效:用药180 min内心电图改善不明显,自觉症状无明显变化。治疗结果:35例中痊愈7例,显效19例,有效4例,无效5例。疗效和中医辨证的证型及发病后就诊时间的早晚皆有一定关系。见表12-1-26,表12-1-27。

表12-1-26 参附注射液治疗频发性室性早搏疗效和中医辨证的关系

中医辨证 例数 痊愈 显效 有效 无效 心肾阳虚
血脉瘀阻
心气不足 16
14
5 7
0
0 9
8
2 0
3
1 0
3
2

表12-1-27 疗效和发病后就诊时间的关系

发病后就诊时间 例数 痊愈 显效 有效 无效 10h内
10～18h 25
10 7
0 18
1 0
4 0
5

邓氏[63]选同期住院或门诊患者。A组21例,男15例,女6例;平均51.6岁(范围18～65岁);基础心脏病为冠心病11例,心肌炎7例,心肌病3例;其中合并高血压病8例,合并高脂血症5例,合并糖尿病3例。B组20例,男13例,女7例;平均年龄49.8岁(范围16～60岁);基础心脏病为冠心病10例,心肌炎5例,心肌病4例,风心病1例。其中合并高血压病5例,合并高脂血症3例,合并糖尿病2例。诊断依据:诊断主要根据常规静息心电图和动态电图表现。分为下列4类:持续而严重的窦性心动过缓,<50次/min,阿托品试验<90次/min;窦房传导阻滞,伴或不伴缓慢的逸搏心律;窦性停搏<2s以上,伴或不伴缓慢的逸搏心律;窦性心动过缓,窦性停搏,窦房传导阻滞或逸搏伴阵发性室上性心动过速、房颤、房扑,即所谓的心动过缓——心动过速综合征。A组:用人参10g,制附子5g,加水1000ml,煎煮浓缩至50～100ml,每日1剂。用蜂蜜作饮。连续服用2个月。B组:用654-2片,10mg,每日4次口服。男性患者有前列腺增生或对654-2片收效不佳时,改用喘息定片10mg,每日4次口服。连续用药2个月。两组患者在治疗期间均用丹参液或能量合剂静滴。部分患者静滴蝮蛇抗栓酶。
疗效判定标准:显效:临床症状明显改善,阿托品试验窦性心率达90次/min以上,或动态心电图日常活动状态下窦性心率达90次/min以上者。有效:临床症状改善,动态心电图平均心率较治疗前增加20次/min以上,未达到显效标准者。无效:临床症状虽有好转,动态心电图平均心率增加<20次/min或无变化者。治疗结果见表12-1-28。

表12-1-28 参附汤治疗病窦综合征的疗效比较

　 例数 显效(%) 有效(%) 无效(%) 治疗组
对照组 21
20 12(57.1)
4(20.0)* 6(28.6)
5(25.0) 3(14.3)
11(55.0)*

与治疗组比* P<0.01
李氏报道[64]用参附汤加味治疗房室传导阻滞42例,患者均经心电图证实合并有Ⅱ度Ⅲ型房室传导阻滞(AVB)。中医组23例,男9例,女14例,平均年龄39.5±6.5(22～65)岁;冠心病3例,风湿性心脏病12例,扩张型心肌病4例,高血压心脏病2例,其他2例。西医组19例,男10例,女9例,平均年龄38.3±7.3(18～67岁);其中风湿性心脏病10例,冠心病5例,扩张性心肌病2例,高血压心脏病2例。所有患者排除电解质紊乱及药物中毒引起者。治疗方法:中医组用参附汤加味:人参12g,附子15g,干姜12g,桂枝15g,丹参30g,川芎10g,檀香12g,薤白15g,甘草10g。水煎服,每日1剂,10d为1疗程,隔3d再用药。西医组:异丙基肾上腺素1mg,阿托品10mg加5%葡萄糖注射液500ml中,持续静脉点滴,7d为1疗程,隔3日再用药。入院后常规记录心电图,每日1次,据心电图反应将治疗结果分为两类:有效:治疗后P-R间期恢复正常;Ⅰ度AVB;Ⅱ度Ⅱ型AVB;脱落次数减少(阻滞程度减轻)。无效:治疗后无变化或转为Ⅲ度AVB。结果:中医组23例患者中,入院前心率为42.1±3.4,治疗后有效者12例,心率为76.4±7.9,占52.17%;无效者11例,心率为51±5.5,占47.83%。西医组19例患者中,治疗前心率为36.9±6.8,经治疗后,有效者4例,心率为84±3.5,占西医组全病例的21.05%;无效15例,占78.95%。两组比较P<0.01,提示应用参附汤加味治疗Ⅱ度Ⅱ型AVB效果明显优于用异丙基肾上腺素及阿托品。用参附汤1周后即可提高心室率。在12例有效病例中,3个月后随访,其中有2例复发,10例保持稳定。西医组4例有效患者中,3例复发,1例稳定。
王氏[65]应用参附汤注射液治疗室上性心动过速(下称室上速)患者13例,取得了较好疗效。13例患者中10例为急诊门诊患者,3例为住院患者。男性7例,女性6例;年龄21～59岁,平均39岁。原发病:预激综合征3例,风湿性心脏病2例,冠心病4例,原因不明4例。室上速发作时间:20 min～8 h。全部患者均有心悸、胸闷、头晕等症状,其中3例伴面色苍白,肢冷汗出,脉微细。心率150～190次/min,平均176次/min;血压11～16/6～11 kPa,平均12.38/9.21 kPa。全部患者经心电图检查:心率150～190次/min,QRS波不宽,节律规整,未见P波或TP融合,心电图诊断均为室上性心动过速。治疗方法:首次给参附注射液20 ml直接静脉注射,3 min内注射完毕,若心律未转复,30 min后再静脉注射参附注射液40 ml,3 min内注射完毕。患者在治疗中可配合吸氧等对症治疗。但不加用任何抗快速性心律失常的药物或兴奋迷走神经的机械刺激方法。结果:13例患者治疗后,经心电图检查全部恢复窦性心律。转律时间最快者3 min,最慢30 min,平均9.2 min。转律后心率60～80次/min,平均72.6次/min。血压13～18/8～11 kPa,平均14.30/9.86 kPa。在治疗中及治疗后,患者除面部、胸部有发热感外,未见有其他不良反应。通过13例患者的治疗,显示该药对室上速有较好的疗效。具有作用快速,转律成功率高,适应范围广泛,无明显毒副作用等优点。参附注射液在休克患者的治疗中有明显的升高血压的作用,但从13例患者治疗前后血压的变化看,该药在室上速患者的治疗中,升高血压的作用并不明显,该药能同时具有抗缓慢性心律失常的作用,又有抗快速性心律失常的作用,甚为罕见。
何氏[66]用参附注射液治疗急性左心衰伴快速型心律失常住院和急诊病人20例,其中男12例,女8例;年龄65～80岁,平均72岁;原发病肺气肿合并感染肺心病16例,肺癌合并阻塞性肺炎2例,冠心病、糖尿病各2例;发作时心电图提示快速房颤8例,伴室上速、窦速各6例;发作时出现高血压危象者5例。全部病例均表现为突然极度呼吸困难,哮鸣音,端坐呼吸,烦躁不安,唇色紫绀,大汗淋漓,咳嗽咯大量泡沫浆液样痰,心率增快,两肺遍布湿啰音及哮鸣音。用参附注射液60 ml直接静脉推注,每15 min推注1次,共4次。其中部分病人在应用西地兰等西药无效后改用本法。并记录病人用药前症状、心率、血压情况和用药后1 h症状、心率、血压的变化。显效:血压改善、心率下降,症状体征明显改善并稳定在24 h内无加重;有效:血压改善、心率下降,症状体征改善但未达显效标准;无效:症状略有改善,但血压、心率无变化者。结果:显效8例,有效10例,无效2例。用药前后心率(HR)、收缩压(SBP)和舒张压(DBP)的变化见表12-1-29;5例高血压患者用药前后血压变化见12-1-30。

表12-1-29 参附注射液治疗急性心衰伴快速心律失常用药前后心率、血压变化(±s)

　 用药前 用药后 P值 HR(次/min)
SBP(kPa)
DBP(kPa) 164.5±27.1
20.1±5.1
11.8±3.2 118.3±15.2
18.5±3.7
10.8±1.7 <0.01
<0.01
<0.05

表12-1-30 高血压病人用参附注射液前后血压变化(±s)

　 n(例) 用药前 用药后 P值 SBP(kPa)
DBP(kPa) 5
5 26.6±1.3
15.2±2.3 23.6±2.6
12.8±1.8 <0.05
<0.01

从表12-1-29、表12-1-30中可知各观察指标用药前后比较有显著性差异(P<0.01或0.05)。
张氏[67]治疗复杂型心律失常1例,患者为不完全性房室传导阻滞,频发性室性早搏(二联律),参麦针加参附针静推,静滴,症状改善。“复方参附散”治疗12例因冠心病所致的窦性心动过缓。结果平均心律增快10次以上者7例,增快5～10次者4例,增快不足5次者1例^[68]。应用本药治疗1例冠心病Ⅲ度房室传导阻滞并发心源性脑缺氧综合征、心源性休克的病人和1例阵发性室上性心动过速低血压状态病人,均取得即刻转为窦性心律的效果^[69]。参附汤治疗2例急性心肌炎并完全性房室传导阻滞,并发生心源性脑缺血综合征,1例Ⅱ度房室传导阻滞皆获得成功^[70]。心动过缓,高血压性心脑病合并冠心病后的高度房室传导阻滞,经本方加减治愈^[71,72]。另有报道参附汤加味治愈心房纤颤^[73]、完全性房室传导阻滞^[74]、病态窦房结综合征^[75]。
3.治疗心功能衰竭
胡氏^[76]报道以参附汤合生脉散回阳固脱,益气敛阴为主方,随证佐以温阳利水、理气化痰、活血化瘀、纳气敛汗之剂,共治慢性心衰16例(其中顽固性心衰2例),男6例,女10例,年龄最大76岁,最小35岁。其中风湿性心脏病并心衰9例;肺原性心脏病并心衰5例;冠心病、急性广泛性前壁心肌梗死并心衰1例;高血压冠状动脉硬化性心脏病、急性前侧壁心肌梗死并心衰1例。主要症状、体征、舌苔见表12-1-31、表12-1-32、表12-1-33。

表12-1-31 慢性心衰的症状情况

症
状 呼 吸 困 难 咳
嗽 食
欲
不
振 腹
胀 恶
心
呕
吐 尿
量
少 自
汗
盗
汗 精
神
萎
糜 胸
闷
心
悸
心
慌 手
足
欠
温 劳累后
呼吸困难 端坐呼吸 阵发性夜间
呼吸困难 例
数 2 10 4 13 13 13 5 10 10 13 15 9

表12-1-32 慢性心衰的体征情况

体
症 心室扩大 心率增快 两肺底
湿啰音 胸
水 颈
静
脉
充
盈 肝肿大
和压痛 肝颈逆
流征阳性 凹陷性
水肿 紫
绀 左 右 左右均大 >100次/min >120次/min 例
数 5 4 7 5 9 9 2 11 11 11 10 12

表12-1-33 慢性心衰的舌象脉象

舌
苔 舌 质 舌 苔 脉 象 绛 红 淡红 淤点 薄白 黄 黄腻 少津 促 结 虚 细数 例
数 5 6 4 5 10 2 4 6 8 3 11 2

主方:参附汤合生脉散:红参(气阴两虚者用糖白参)、熟附子、五味子、麦冬。加减法:水肿甚者,合真武汤或苓桂术甘汤;咳喘痰涎迫肺者,合苏子降气汤;汗出亡阳者,加龙骨、牡蛎、凤凰衣等;舌紫暗、胸胁隐痛者,加丹参、红花、川芎、桃仁、瓜蒌、薤白。服法:上方浓煎(红参或白参另燉),混合顿服,每次药液量不超过150ml。心衰严重者,日二剂,分四次服。
临床疗效:心力衰竭的症状和体征消失,心功能恢复正常为治愈;症状和体征减轻,心功能改善为好转;症状加剧,体征未改善或加重为未愈。治疗结果:治愈13例,好转3例。
定氏[77]用参附汤加味治疗冠心病合并心力衰竭102例,住院病人91例,门诊病人11例。男75例,女27例,35～45岁10例,45～55岁43例,55岁以上49例。最小35岁,最大77岁,病程1个月～4年25例占24%,5～9年48例占47%,10年以上29例占28%。最短1个月,最长11年。基本方为参附汤加味:制附片15g(先煎),西洋参10g(浓煎兑服),三七粉4g(冲服),赤芍、降香、泽泻各15g,丹参、茯苓皮各30g,檀香6g(后下)。胸痛憋闷者加川芎、红花各10g,沉香4g(后下);双下肢肿胀者加黄芪30g,白术15g;唇甲青紫,大汗出,心悸不宁,四肢厥冷,脉沉微欲绝者,为本病之重症,当重用西洋参至15g(浓煎),加龙骨、牡蛎各40g回阳救逆固脱,并配合西医对症治疗。上药水煎服,每日1剂分3次服。10剂为1疗程,连用3个疗程,服10剂无效者,改方治疗。102例,均选休息时心电图有缺血ST-T波改变者为治疗对象。有前胸压榨痛,或胸骨后缩窄痛。严重者有突发性胸闷、气喘、端坐呼吸,心动过速或过缓、烦躁、紫绀等。心电图检查:ST段下移0.1mV以上,T波低平或倒置,电轴显著左倾,91例病人出现左前分支传导阻滞,33例病人频发室性早搏。血脂化验:三酰甘油增高(超过1.2 mmol/L以上)部分病人胆固醇增高(超过6 mmol/L以上)。临床症状消失,心电图正常,血脂检查正常为临床治愈,服药30 d,治愈8例。好转:服药40 d,临床症状消失,心电图好转,血脂化验接近正常67例;未愈:服药10剂以上,临床症状、心电图、血脂化验均无改善者7例。治愈率为26.4%,好转率为65.6%,总有效率为92%,无效为8%。
王氏等^[78]用参附注射液治疗慢性充血性心力衰竭患者40例,显效7例,有效16例,无效7例,总有效率82.5%。治疗后心功能改善明显,有显著性差异,治疗过程中无明显副作用。
赖氏^[79]观察本方能促进心衰左室收缩功能的恢复。196例慢性充血性心力衰竭(CHF)患者分别予以参附汤和地高辛治疗,并以左室收缩功能的改变评价两组药物的疗效。196例患者,随机分为两组,参附汤组98例,男58例,女40例;年龄21～85岁,平均61.3岁;病程3～7年,平均5.5年;心功能分级采用美国纽约心脏病协会(NYHA)分级标准,Ⅱ级36例,Ⅲ级62例;地高辛组98例,男53例,女45例;年龄19～83岁,平均63.7岁;病程3～6年,平均5.0年;心功能分级Ⅱ级32例,Ⅲ级66例,两组资料有可比性(P>0.05)。参附汤组:口服参附汤(人参30g,附片20 g,加水文火煎煮,3次取汁90 ml),每次温服30 ml,每日3次,连服2周。地高辛组:每日晨服地高辛0.5 mg,连服1周,继而减量晨服0.25 mg,连服1周。两组患者均予以低盐饮食。凡水肿明显者,酌加利尿剂。两组患者均在服药前、后接受多普勒超声心动图检测。观察指标:主动脉血流速度峰值(PV);主动脉血流加速度(AVR);主动脉血流收缩期流速积分(SVTI)。采用彩色多普勒超声诊断仪,取标准心尖四腔心切面,置取样容积在主动脉瓣环水平,取得满意的血流频谱后静止、回放,测量并计算上列参数。疗效判定标准:凡心功能改善2级为显效,改善1级为有效,无改善、恶化或死亡为无效。治疗结果:参附汤组显效39例,有效47例,无效12例;地高辛组显效26例,有效42例,无效30例。参附汤组临床有效率为87.8%,明显高于地高辛组的69.4%(P<0.05)。左室收缩功能改变见表12-1-34。治疗后两组患者各项指标均有明显改善,与治疗前比较有显著性差异(P <0.05);与地高辛组相比较,参附汤组改善更显著(P<0.05)。

表12-1-34 参附汤治疗心衰前后左室收缩功能变化比较(±s)

组别 病例数　 PV(m/s) AVR(m/s2) SVTI(cm) 参附汤 98 治疗前
治疗后 0.79±0.13
1.61±0.15*△ 9.65±3.01
13.51±2.07*△ 18.01±2.27
25.15±3.42*△ 地高辛 98 治疗前
治疗后 0.76±0.01
0.95±1.13* 9.53±1.72
11.27±2.10* 17.41±2.38
19.67±3.17*

注:与本组治疗前比较:* P<0.05;与地高辛组治疗后比较,△P<0.05
在对196例CHF患者的治疗过程中注意到,地高辛对左室舒张功能不全的CHF疗效远不如对左室收缩功能不全的CHF满意。而参附汤对左室舒张功能不全的CHF与左室收缩功能不全的CHF疗效同样明显。因此,参附汤治疗轻、中度CHF的效果优于地高辛。
王氏[80]用重剂参附汤抢救急性心力衰竭2例;徐大勇^[81]加用参附汤治疗顽固性心力衰竭20例;张孝礼对20例肺心病心功能不全,以参附汤加味治疗,显效9例,好转7例,无效3例,恶化死亡1例,有效率为80%^[82]。另有报道以参附汤为主治疗急性心力衰竭和“冠心”心衰均获效^[83]。王氏^[84]在参附汤基础上加味成参附强心汤治疗心衰138例效好。
4.治疗冠心病、心肌梗死及脑血栓
张氏[85]治疗高血压、冠心病40例,均停服其他抗高血压和抗心律失常药物1周,口服倍他乐克,静注参附注射液。结果:血压明显下降,心率降低,治疗前后比较,P<0.01;心功能改善,EF、SV、CO、CI用药后有明显提高,P<0.01;改善心电图ST-T,P<0.01,对P-R、Q-T无明显影响,P>0.05。
李氏[86]报道用参附针抢救治疗真心痛86岁女患者1例,用参附注射液60ml兑入1000ml液体中持续滴注,滴速20滴/min,疗效不凡。参附代血浆治疗冠心病33例,脑血栓10例,收到满意疗效。用药后胸闷、失眠症状得到改善,食欲增进,体力增强。本药还有利尿作用。脑血栓患者用本方后,语言障碍,头晕,头痛,面瘫及行走困难等症均得到明显改善^[19]。
5.治疗结石性肾绞痛
沈氏^[87]用参附汤加味治疗结石性肾绞痛30例,均有肾绞痛发作的典型的临床症状和体征,并经X线摄片、B型超声波检查,确诊为泌尿系结石。其中男性26例,女性4例;年龄最小者20岁,最大69岁;病史最短者3d,最长者7年,1年以内者14例;肾结石14例(双肾结石2例,单肾结石9例,肾合并输尿管结石3例),输尿管结石13例(上段结石4例,中段结石3例,下段结石6例),膀胱结石3例;合并1侧肾盂积水3例。
治疗方法:参附汤加味:党参、茯苓各30g,附子15g,生姜6g,制乳香12g,制没药10g。加减:上尿路久滞大结石,尤其表面精糙、形状不规则者加川牛膝30g,莪术10g,冬葵子15g。肾结石形体较小而规则,滞留时间较短者加海金砂15g,广金钱草、石苇各30g。输尿管结石加乌药10g,威灵仙12g,王不留行15g,广金钱草30g。膀胱结石者加萹蓄15g,滑石、车前草、石苇各30g。辅助治疗:多饮水,坚持活动跳跃,并施空掌叩击结石所在部位的机体。疗效观察:服1～3d后肾绞痛消失28例(肾结石13例,输尿管结石12例,膀胱结石3例),肾绞痛缓解1例(肾结石),无效1例(输尿管结石)。
孙氏[88]用参附注射液静推加静滴治疗输尿管结石、胆结石之剧痛引起休克、对血压下降,四肢厥冷,止痛都有很好的效果,对无阳气暴脱者止痛效果不明显,笔者认为其止痛作用可能是通过振奋人体阳气、推动气血运行,解除气机壅塞而达到作用的。
6.对化疗毒性的保护作用
对照组48例常规给利血生及复方阿胶浆治疗,观察组46例,在此基础上加用参附注射液,化疗前及化疗后第1、2、3周复查血常规,将数据进行统计学处理。结果:观察组WBC在化疗后第1、3周高于对照组(P<0.05),第2周则更加明显(P<0.01);血Pc与Hb则分别在第2、第3周高于对照组(P<0.05)。表明:参附注射液对化疗造成的骨髓抑制有一定的治疗作用[89]。颜博[90]还观察了参附注射液对化疗中阿霉素心脏毒性的影响。
7.其他
宋氏^[91]用参附注射液治疗重度椎—基底动脉缺血性眩晕,观察组100例,给予参附注射液静注,对照组40例予654-2针剂加脑复康静滴。结果参附液组痊愈率63%,对照组为20%,P<0.01。眩晕症状观察组24h消失率63%,对照组为20%,P<0.01。
参附代血浆治疗慢性迁延型肝炎27例,肝硬化1例。服药后可使患者自觉症状得到改善,转氨酶显著下降,蛋白升高,肿大之肝脏缩小^[19]。
本方加味治疗新生儿硬肿症、新生儿硬皮症,以及先天不足、发育不良、婚后5年无嗣和下肢萎废的慢性患者,均获得良好效果^[92～94]。
邱氏^[95]用参附注射液加小剂量去氢甲基睾酮辨证治疗肾阳虚型再障贫血30例,静滴,经3～6个月的治疗,总有效率为80%。认为参附注射液可能有促进造血干细胞的分化增殖、改善骨髓造血微环境的条件和机体免疫调控作用。
董氏应用参附汤加味治疗63例肾阳虚患者,取得良好效果。其中男34例,女29例;年龄最大83岁,最小26岁;其中哮喘3例,眩晕5例,水肿10例,寒厥2例,不孕症2例,遗尿7例,阳痿7例,遗精10例,月经不调5例,带下病2例,泄泻10例。基本方:红参6g(另炖),附子10g,仙茅10g,似灵脾10g,菟丝子15g,山药10g,牛膝10g。加减:水肿加大腹皮;失眠加合欢皮;哮喘加五味子;胸闷加佛手;遗精加沙苑、蒺藜;泄泻加石榴皮;小便失禁加益智仁;四肢厥冷加桂枝。水煎服,每日1剂。治疗结果:治愈(症状和体征全部消失)36例;显效(主要症状、体征消除)17例;好转(主要症状、体征基本消失)8例;无效(症状、体征无改变)2例,总有效率96.8%。
另有用参附汤加味治疗多汗症^[97]、急性脑梗死^[98,99]等的报道。
【不良反应】
刘氏报道静滴参附注射液致过敏性休克1例^[100]。