2.牛黄 珍珠 : 【中医理论】
牛黄苦寒,清热解毒力甚,有清心定惊,豁痰开窍之功。珍珠咸而寒,除镇心定惊外,还有清热、祛痰、解毒作用。二药合用,加强清热解毒、定惊息风、豁痰开窍之力。一般牛黄用0.2～0.5g,入丸散。珍珠0.3～1g,入丸散。
【化学研究】
取人工牛黄30g,珍珠50g等研细制成珠黄散。
1.牛黄的薄层鉴别^[1]取本品5g,加乙醇20ml,搅拌5min,倾取乙醇液,置水浴上蒸干,残渣加乙醇1ml制成含2mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述溶液各5μl,分别点于同一块硅胶G板上,以异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水(10:5:5:3:1)上层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以磷钼酸试液,在105℃烘5min。结果,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同的颜色斑点。
2.珍珠的鉴别^[1]
取本品2g,置具塞试管中,加氯仿10ml,振摇使基质溶解。静置,倾去上层液,取残渣置显微镜下观察。不规则碎块半透明,有光泽,具颗粒性,有的可见细密波状纹理。
3.胆红素的定量分析^[2]
测定条件的选择:取珠黄散适量,加氯仿使溶解,滤过,弃去初滤液,分取续滤液。用UV-250可见-紫外分光光度计,在350-500nm波长范围内扫描。结果表明供试品在453±1nm波长处有最大吸收,故选用吸收波长453±1nm。胆红素回归方程为:A=0.1955C-0.001524。r=0.9999。可见:胆红素在0.2～1.0μg间,胆红素的量与吸收度之间呈线性关系。
回收率试验,取空白供试品适量,准确加入一定量的人工牛黄,加氯仿振摇15min,使溶解,氯仿定溶,放置15min,滤过,弃去初滤液,续滤液在453±1nm波长测定吸收度。按胆红素C33H36O6N4的吸收系数(E1%1cm)为1038计算,结果见表11-2-1。
样品测定:准确称取供试品适量(约相当于人工牛黄80mg),加氯仿适量,振摇使溶解,按回收试验的测定方法操作,结果见表11-2-2。

表11-2-1 回收率试验

　 加入人工牛黄相当胆红素量(mg) 实验测得胆红素量(mg) 回收率(%)　 1
2
3
4
5
6
7
8 0.529
0.531
0.530
0.530
0.528
0.527
0.523
0.530 0.529
0.538
0.535
0.542
0.538
0.529
0.543
0.532 100.0
101.3
101.0
102.3
101.9
100.4
103.8
100.4 平均回收率101.4%
RSD=1.24%

表11-2-2 牛黄珍珠胶囊中胆红素含量

样品 1 2 3 4 含量(mg) 0.67 0.64 0.65 0.66

【药理研究】
1.镇静作用^[3]
1.1 对小鼠外观行为活动的影响
以小儿热必清(牛黄、珍珠、冰片等组成)为试验样品。取雄性活泼、反应敏捷的小鼠24只,体重18g左右,随机分为3组。服热必清0.58g/kg,服速效感冒丸0.58g/kg,对照组服等容积的生理盐水。服生理盐水组的小鼠,行为活动无明显变化。速效感冒丸组亦未见抑制作用,给小儿热必清药后,动物跑动,攀笼活动开始减少,小鼠多聚堆,闭目,倦卧笼底,活动次数减少,表明动物处于抑制状态。但对外界给予的刺激仍有反应。
1.2 对小鼠自发活动和阈下剂量戊巴比妥钠作用的影响
小鼠分热必清,速效感冒丸和生理盐水3大组,每大组又分5个实验小组,每组3只。服药剂量同上,给药30min后用GJ-7902型E光道小鼠活动记数仪,同时测定小鼠10min内活动次数并以翻正反射消失作用为小鼠睡眠指标,结果见表11-2-3。

表11-2-3 热必清对小鼠自发活动和戊巴比妥钠的影响

组别 组数 自发活动数(±s) P值 睡眠数(只) P值 热必清
速效感冒丸
生理盐水 5(3只/组)
5(3只/组)
5(3只/组) 344.8±20.69
972.9±9.37
698.7±87.99 <0.001 14
0
1 P<0.001

从表11-2-3中可以看出,热必清有较好的镇静作用。速效感冒丸未见有镇静作用。
2.镇痛作用^[3]
热板法:取18g左右的雌性小鼠21只,随机分为3组,每组7只,控制测痛板恒温于55℃,以小鼠舔后肢作为痛反应指标。给药前测痛阈2次,每次间隔5min,取其均值在5～15s者。3组服药剂量同上,给药后30,60,90,120min,各测1次痛阈60s无痛觉者按60s计算,结果表明,由人工牛黄,珍珠组成的热必清有较强的镇痛效应。同时冰醋酸扭体法实验证实,热必清能明显抑制小鼠扭体反应。
3.解热作用^[4]
以珍珠、牛黄等中药组成的珍黄含片原料粉末(不含辅料)为供试样品。健康雄性家兔,体重大于1.5kg,选择正常体温38.3-39.2℃家兔试验:肌肉注射10%蛋白胨10ml/kg,使之发热,体温升高超过1℃后,灌胃给药于30,60,120mim各测体温一次结果:大剂量的珍黄含片对家兔有明显的解热作用。见表11-2-4。

表11-2-4 珍黄含片的解热作用

组别 剂量
(g/kg) 体温(±s,℃) 正常 致热后 给药后 30min 40min 120min 对照组 — 38.41±0.31 39.40±0.40** 39.70±0.31 39.70±0.31 39.45±0.24 阿司匹林组
珍黄含片组 100
200
400 38.56±0.28
38.55±0.09
38.65±0.28 39.96±0.27**
39.77±0.37**
39.81±0.18** 38.71±0.31△△
39.38±0.64
38.62±0.59△△ 38.57±0.36△△
39.45±0.56
38.55±0.42△△ 38.50±0.40△△
39.15±0.59
38.67±0.34△△

注:与正常体温比较:* * P<0.01;与致热后体温比较:△△P<0.01,n=7
4.抗炎作用^[4]
4.1 对大鼠角叉菜胶所致足肿胀的影响
雄性SD大鼠,体重200～230g,分成4组,珍黄含片灌胃给药,给药1h后,皮下注入1%角叉菜胶0.1ml致炎,每隔1h测量足肿胀1次,共6次。结果:珍黄含片有较好的抗炎作用,大剂量的抗炎作用更明显(P<0.01),用药后1～6h对足肿胀抑制为率29%～36%。

表11-2-5 对大鼠角叉菜胶足肿胀的影响

组别 剂量
(mg/kg) 动物数 足肿胀(±s,mm) 1h 2h 3h 4h 5h 6h 生理盐水 - 9 3.44±1.02 4.17±1.20 5.29±1.06 5.38±0.66 5.38±0.63 5.23±0.51 地塞米松
珍黄含片 2.5
200
400 8
8
8 1.39±0.46**
2.62±0.84*
2.17±0.33** 1.81±0.48**
3.64±1.07
3.00±0.53** 2.30±0.32**
4.24±1.46
3.45±0.95** 2.28±0.24**
4.51±1.13
3.80±0.49** 2.19±0.23**
4.14±1.00**
3.86±1.15** 2.17±0.34**
4.01±1.16*
3.45±0.53**

注:与生理盐水组比较:* P<0.05,* * P<0.01。
4.2 对大鼠棉球肉芽肿的影响
SD雄性大鼠,体重150～170g,每日灌胃给药1次,连续7d,给药第2d,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉,于腹股沟放40mg消毒棉球各1个。末次给药后24h,处死大鼠,剥离棉球肉芽肿,60℃烘2h,称重计算,结果可见珍黄含片低剂量组及高剂量组与对照组比较,均有显著性差异。珍黄含片能显著抑制棉球肉芽肿生长。
5.对免疫系统的作用^[4]
5.1 对DNCB致敏小鼠迟发型皮肤超敏反应的影响
将体重18～22g雄性小鼠分组并灌胃给药,每天1次,于给药后的第4d,在小鼠颈部脱毛位以50%DNCB一丙酮溶液2μl致敏,致敏后的第7d在小鼠腹部脱毛的皮肤上,均匀涂布2.5%DNCB-丙酮溶液20μl进行攻击,24h后尾静脉注射1%伊文思蓝溶液10ml/kg,30min后处死小鼠,取腹部蓝染皮肤剪碎,用1:1丙酮生理盐水溶液2ml浸泡36h,离心,取上清液测光密度(OD)值(λ=610nm)结果见表11-2-7。

表11-2-6 对大鼠棉球肉芽肿的影响(±s)

组别 剂量(mg/kg) 动物数 肉芽肿重(mg/100g体重) 生理盐水 — 7 97.50±20.12 地塞米松
珍黄含片 2.5
200
400 6
6
7 36.75±9.55**
68.12±10.96**
52.37±14.53**

注:与生理盐水组比较:**P<0.01

表11-2-7 对DNCB致敏小鼠迟发型皮肤超敏性反应的影响

组别 剂量(mg/kg) 动物数 OD值(±s) 生理盐水 — 10 0.199±0.076 珍黄含片 200
400 10
9 0.343±0.192*
0.436±0.274*

注:与生理盐水组比较:*P<0.05
结果显示,珍黄含片2个剂量组均能明显地增强DNCB所致小鼠迟发型皮肤超敏反应。
5.2 对绵羊红细胞(SRBC)致敏小鼠溶血素生成的影响
雄ICR小鼠30只,体重18～22g,随机分为3组,按表11-2-8灌胃给药,每天1次,连续5d,给药的当天用10%SRBC 0.2ml腹腔注射免疫小鼠,致敏后第5d摘眼球采血,取血清40μl,加入生理盐水10ml,56℃水浴30min灭活补体,取此血清样本1ml,加入10% SRBC 0.5ml和用生理盐水稀释的1:10补体1ml混匀,37℃水浴温孵10min,移入冰浴终止反应,离心,取上清液1ml检测,计算半数溶血值(HC50),结果见表11-2-8。

表11-2-8 对SRBC致敏小鼠溶血素生成的影响

组别 动物数 剂量(mg/kg) HC50(±s) 生理盐水 10 — 26.02±29.5 珍黄含片 10
10 200
400 359.5±18.3
417.4±58.3*

注:与生理盐水组比较:*P<0.05
珍黄含片的大剂量组(400mg/kg)的HC50生理盐水组比较,差异有显著意义(P<0.05)。
6.抑菌作用^[4]
用无菌蒸馏水将试验药物配制成不同浓度,即1.5g/ml、1g/ml、0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml。对照药物选用青霉素钠盐,稀释成100U/ml。
对不同种的细菌选用不同的培养基,经无菌消毒后,配成固体培养平皿、血平皿、巧克力平皿,将所需菌种移入肉汤培养基,培养后涂布于固体培养基。肺炎球菌、乙型链球菌及嗜血杆菌直接移种斜面后,再密集划线于培养皿,然后用打孔器打孔(内径8mm),加入不同浓度的药物于孔内,同时设青霉素对照,于37℃培养24h后观察结果,测量抑菌圈大小(mm),二次实验平均抑菌圈见表11-2-9。

表11-2-9 珍黄含片对9种细菌株的抑菌效果(抑菌圈直径,mm)

菌 种 药物浓度(g/ml) 青霉素
100U/ml 2.0 1.0 0.5 0.25 0.125 大肠杆菌 14 - - - - 12 绿脓杆菌 13.5 13 12.5 - - - 弗氏痢疾杆菌 13 - - - - 14 金黄色葡萄球菌
流感嗜血杆菌
肺炎双球菌
甲型溶血链球菌
乙型溶血链球菌
丙型溶血链球菌 18
13.5
13
15
12
13 13.5
-
-
-
-
-
- 12.5
-
-
-
-
- -
-
-
-
-
- -
-
-
-
-
- 23
13
18
(未做)
18
(未做)

注:表内9种细菌株均为标准菌株
7.对小鼠的祛痰作用
取昆明种雄性小鼠,体重18～24g,按表5分组,实验的前1d晚上禁食,只给水,灌胃给药后15min,腹腔注射0.5%酚红溶液0.1ml/10g,30min后颈椎脱臼处死,分离气管,以5%NaHCO3溶液每次0.5ml灌胃洗气管共3次,合并3次洗液,用752型紫外分光光度计(λ=546nm)测定酚红的光密度值,结果见表11-2-10。

表11-2-10 对小鼠酚红排出量的影响

组别 剂量(mg/kg) 动物数 OD值(±s) 生理盐水 — 11 0.324±0.081 珍黄含片 200
400 10
10 0.349±0.089
0.424±0.041**

注:生理盐水组比较:* * P<0.01
实验可见,珍黄含片大剂量组(400mg/kg)与生理盐水组相比较有极显著性差异(P<0.01)。
【毒理研究】
急性毒性试验^[4]
预试验测不出小鼠100%死亡的剂量(DM)。最大耐受量试验证实珍黄含片小鼠1次灌胃最小致死量大于20g/kg,腹腔注射时LD50为4.18g/kg,LD50量信区间为:3.55～4.91g/kg。
【临床应用】
1.治疗慢性溃疡性结肠炎
张氏^[5]等报道用肠炎散Ⅰ,Ⅱ号(二者主要成分为牛黄、珍珠)治疗300例慢性溃疡性结肠炎,每日灌肠1次,30d为1疗程。
结果痊愈(症状消失,乙状镜检查结肠粘膜恢复正常,随访半年未有复发)122例,占40.7%;基本痊愈(症状消失,肠粘膜接近正常或未完全恢复)67例,占22.3%;好转(症状有所减轻,或肠粘膜有所改善者)102例,占34%;无效(症状及肠粘膜无改善)9例,占3%。总有效率97%。
2.治疗小儿慢性牙髓炎
刘氏^[6]报道用牛黄珍珠等组成的六神丸治疗小儿慢性牙髓炎40例,总有效率达90%。其中有效(疼痛缓解,无叩痛,或仅有轻微叩痛者)36例,无效(患牙脱落,需重新封失活剂)者4例。
朱氏^[7]用珠黄散治疗牙龈肿痛1例,用药2d面部肿胀消退,牙龈红肿痛消失。
3.治疗小腿溃疡
徐氏^[8]用牛黄珍珠散治疗小腿溃疡36例;其中男25例,女11例,年龄16～62岁;治疗时间最长46d,最短1周,结果33例痊愈,3例无效,总有效率92.4%。牛黄珍珠散对多种细菌有较强的抗菌作用,并能改善创面营养,改善病灶局部供血,减少炎性渗出提高免疫力,促进疮面修复。
4.其他
朱氏^[7]用珠黄散治疗甲沟炎,3d而愈;疖肿患者1例,2d而愈;治疗炎性痤疮也获良效。
牙龈肿痛:陆某,男35岁,牙龈肿痛3d,不能进食咀嚼。口腔科诊治后,给予抗生素、甲哨唑等药,牙龈肿痛仍存,一侧面部肿胀明显,给予珠黄散涂于红肿牙龈处,第2d面部肿胀消退、牙龈红肿痛也随之消失。
甲沟炎:李某,男,40岁,左拇趾外侧甲沟外红肿疼痛5d,行走后磨擦肿痛加重,曾外敷三黄膏3d,胀痛不退,即采用珠黄散调成浆,放置于护创膏上包扎拇趾甲沟处,第2d疼痛减轻,继敷3次,肿痛完全消失。
疖肿:1例女患者,36岁,会阴部右侧大阴唇处红肿硬疖1周余,约2cm×2cm大小,骑自行车时磨擦疼痛加重,痛苦难言。给予珠黄散处敷2d,硬疖变软,肿痛消失,1周后,局部已无任何瘢痕形迹。
炎性痤疮:青春期少男少女最易患痤疮并易感染,严重的可导致面部产生瘢痕及色素沉着,影响美观,而采用珠黄散局部涂擦后明显控制感染,而且不留瘢痕及色素。