4.枳实 芍药 : 【中医理论】
枳实、芍药、柴胡、炙甘草研末为散,又名四逆散,首载《伤寒杂病论》。用于热邪传里,阳气郁遏不能外达,四肢厥冷,白芍疏肝,缓急止痛,枳实疏肝理气。诸药合用,可使热厥证得除。
【化学研究】
1.样品制备^[1]
柴胡9g,芍药9g,枳实6g,炙甘草4.5g,加工成散剂——四逆散。
1.1 白芍的鉴别
取四逆散颗粒1.5g,加20ml甲醇,超声振荡提取30min,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品1mg,加甲醇1ml使溶解,作为对照品溶液。
吸取上述2种溶液各10μl,点于同一含0.5%CMC-Na硅胶G板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸为(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相同位置上,显相同的蓝紫色斑点。
1.2 枳实的鉴别
取四逆散颗粒1.5g,加20ml甲醇,超声振荡提取30min,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取辛弗林对照品1mg,加甲醇1ml使溶解,作为对照品溶液。
吸取上述2种溶液各10μl,点于同一硅胶G预制板上,以氯仿-丙酮-甲醇-浓氨水为(13:4:3:0.5)为展开剂,展开,展距15cm,取出,晾干,以0.5%的茚三酮乙醇溶液迅速浸润显色,80℃烘约10min。日光检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同的樱红色斑点。
排脓散也是主要由枳实和芍药组成^[2]。排脓散对角叉菜胶足肿的作用特别明显。其有效成分为枳实的柑桔苷和新橙皮苷以及芍药的芍药苷。本文报道这三种成分的分离定量法,结果甚佳。原料生药为枳实、芍药和桔梗。标准物为从日本枳实分离的柑桔苷、橙皮苷和橙皮苷。排脓散的调制,将日本产枳实、芍药和桔梗分别磨粉,以3:3:1重量比混合。试液的调制:排脓散约1g,在50mg甲醇中回流抽提30min之后趁热过滤。残渣重新在50ml甲醇中同样处理。合并抽取液,减压浓缩后,从中准确量取10ml作为试液。各种枳实粉碎后,取1g与排脓散同样处理,作为试液。但含橙皮苷的枳实,用吡啶代替甲醇作为抽出溶媒,同相处理,作为试液。定量装置:双波长薄层层析扫描仪9(岛津CS-910)。狭缝幅:1.25×1.25 mm。测定法:反射锯齿波扫描法。测定波长:λR=600mμm(芍药苷)。薄层板:预涂布硅胶板60F254(Merck Art.5554)。展开溶媒:CHCL3-MeOH-H2O(65:35:10,下层)。标准曲线的制作:配成标准物质2mg/ml的标准溶液,用微量注射器吸取2.5、5.0、10.0、15.0μl标准液在薄层板上点样,三重展开后根据上述条件测定。以所得积分为基础,求得回归直线方程。试液的定量操作:取各溶液1,2,4μl,点在薄层板上,同上操作。所得积分值用于标准曲线方程式,算出试液中含量百分比。重复三次,定时结果取其均值。标准曲线在5～30μg范围内,呈良好直线。在λS=2.0mμmλR=600m μm处可精确检出柑桔苷、新橙皮苷在,λS=230 m μm,λR=600 mμm处可精确检出芍药苷。各种枳实中,日本产的含有柑桔苷和新橙皮苷,中国产的含有橙皮苷,南朝鲜产的含有柑桔苷和枸桔苷。香港市场的炮制枳实片含柑桔苷和新橙皮苷。
2.芍药苷的定量分析
测定条件的选择:Kromasil-C18反相柱(4mm×4mm),粒度5μm,流动相水-甲醇-冰醋酸(64.5:35:0.5);流速0.6 ml/min;柱温40℃AUFS。理论塔板数按芍药苷峰计不低于1800。回归方程为Y=56383.57X-4275.56,r=0.9999。表明芍药苷的样量在0.36～3.6μg时,与峰面呈良好的线关系。回收率试验:取四逆散颗粒0.15～0.3g,精密称定,置500m量瓶中,加入对照品溶液4ml(0.32mg/ml),挥尽溶剂。加甲醇40ml,超声振荡提取1h,放冷,加甲醇至刻度,离心30min,转速9000r/min,取上清液作供试品溶液。精密吸取该溶液10μl,按上述色谱条件测定计算回收率见表9-4-1。

9-4-1 加样回收率测定

样品含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1.0320
1.0320 1.28
1.28 2.3222
2.3472 100.02
102.75　　 1.7544
1.7544
1.7544 1.28
1.28
1.28 3.0700
3.0925
3.0851 102.78
104.53
103.96 102.8 1.67

样品测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,依法测定计算芍药苷含量,结果见表9-4-2。

9-4-2 样品中芍药苷含量

样品批号 含量(mg/g) RSD(%)(n=5) 1
2
3 6.2881
6.7653
6.8845 0.58
1.57
1.81

【药理研究】^[3]
对胃排空及肠推进作用的影响
DDY小鼠34只,雄性,体重25～30g,5周龄,实验前禁食12h。取芍药410g,甘草1.5g,柴胡5.0g,枳实2.0g,粉碎,加去离子水350ml,浸泡30min后煎煮30min,滤过,滤液冷冻干燥至粉末状,溶于20ml去离子水中,以阿托品及西沙必利为阳性对比。将小鼠随机分组,分别经口灌服相应药物,对照组为去离子水,均20ml/kg,15min后灌服2%葡聚糖蓝2000溶液,每只0.4ml。再经30min后颈椎脱臼处死动物,并腹取全部胃肠,自幽门括约肌处取胃,将其内残留色素(葡聚糖蓝2000)充分溶于2ml去离子水中,3500r/min离心15min,取上清玻璃棉滤器过滤,滤液日本日立200-20型分光光度计620nm油吸光度为胃内色素残留量,并求出均值。以对照组均值为100%,均值与其之百分比为相对胃内色素残留率,另分别量取自幽门括约肌至色素最前端及至盲肠距离,以二者之百分比为小肠推进比,并求均值。
结果相对胃内色素残留液66.55±17.65%平均小肠推进比62.28±4.38%。表明四逆散对小鼠胃排空,小肠推进,较对照具有显著性差异(P<0.01)。
【临床应用】
治疗消化不良
李氏^[2]等利用四逆散,研究了对功能性消化不良患者(FD)的胃排空及小推进功能的影响。其中FD患者15人,健康对照18人。FD患者停用一切药物1周,与健康对照者均禁食12h后口服蒸馏水20ml,15min后服

9-4-3 各组相对胃内色素残留率及平均小肠推进比(±s%)

注:①实验组与对照组间比较:* P<0.05,* *P<0.01
②二实验组间比较:△P<0.05,△△P<0.01
120%硫酸钡混悬液300 ml,以东芝800 mA遥控胃肠仪观察并记录钡胃全排控及钡前端至回盲部时间,FD患者连续口服35%柴胡枳实合煎剂20 ml,每日3次,共7d,第8 d重复以上过程。结果提示四逆散有改善FD患者胃肠输送功能的作用。
枳实芍药散主要用于产后腹痛,烦满不得卧;痈脓。枳实汤主要用于小儿风疹、皮肤肿。