一、非特异性酯酶染色的实验

一、实验试剂：

1.作用液：l/20mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂)0.8ml，充分振荡，直至最初产生的混浊物大部分消失为止，加重氮盐，(坚牢蓝B或其他种均可)40mg振荡，过滤后使用.

2.1g/L甲基绿水港派

　二、实验操作：

l.固定新鲜涂片置10%甲醛生理盐水固定5min

2.流水冲洗5min

3.加入37℃作用液中1小时

4.水洗

5.lg/L甲基绿水溶液复染5min

6.水洗，干后镜检.

NaF抑制试验：方法同上，在40ml作用液中加入氟化钠(NaF)6mg(每毫升作用液加NaF-l.5mg)，若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制最好能计算NaF抑制率，其公式为：

(加NaF后NSE积分值/未加NaF时的NSE积分值)×100%凡抑制率>50%者，提示确受NaF所抑.四.实验判定结果：细胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性，胞质内无沉淀者为阴性。

二、非特异性酯酶染色是什么

AS-D-CE：主要存在在于粒细胞内，实为粒细胞系统的特异性酯酶(亦称SPE)。急性粒细胞白血病(M1)、急性粒细胞白血病(M2)、早幼粒细胞白血病(M3)均呈阳性反应，但其阳性程度不一，其中M1阳性较弱，M2较强，M3最强(阳性细胞可达99%)，据报导AS-D-CE持续呈阳性反应者，提示急性粒细胞白血病病性恶化。

慢性粒细胞性白血病，粒细胞系统皆为阳性反应。急性单核细胞白血病绝大多数幼稚细胞呈阴性，少数细胞可呈微弱阳性。急性粒—单核细胞白血病，分化程度较好的原始粒细胞，及其以下阶段的粒细胞皆为阳性反应，但原始及幼稚单核细胞绝大多数呈阴性反应。红白血病原始及幼稚粒细胞呈阳性反应。原始及幼稚红细胞全部为阴性，急性淋巴细胞白血病均为阴性反应，AS-D-CE对鉴别急性粒细胞白血病与急性单核细胞白血病具有重要诊断价值。

非特异性酯酶染色检查nonspecificesterase，NSEα-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)染色检查、单核细胞型酯酶染色检查能将基质液中的α-醋酸萘酚水解，产生α-萘酚，再与重氮染料偶联，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞质内。胞质中出现有色沉淀者为阳性反应。因所用的重氮盐不同，阳性反应的沉淀可分灰黑色或棕黑色。此酶主要存在于单核系细胞中，故有人称之为单核细胞型酯酶。原单核细胞为阴性反应或弱阳性反应，幼单核细胞和单核细胞呈阳性反应。粒系细胞一般为阴性或弱阳性反应。淋巴细胞一般为阴性反应。对鉴别单核细胞白血病有重要意义。正常单核细胞和原始单及幼稚单核细胞均呈阳性反应，其他血细胞呈阴性或弱阳性反应。急性单核细胞白血病细胞呈强阳性反应，但单核细胞中的酶活性可被氟化钠抑制，故在进行染色时，常同时做氟化钠抑制试验。急性粒细胞白血病时，呈阴性反应或弱阳性反应，但阳性反应不被氟化钠抑制。因此，本染色法主要用于急性单核细胞白血病与急性粒细胞白血病的鉴别。

三、非特异性酯酶染色的影响因素

1.酶的活性随标本采集后的时间而逐步下降，应取材2d内染色。

2.a-NAE最佳反应pH为6.0～6.3之间。

3.染色时间和温度要相对恒定。

4.各种基质试剂由于其产品衍生物较多，染色效果可随产地、生产厂商及不同批号等因素相差甚远，所以每次操作应设阴、阳性对照。

5.在酯酶染色反应中切记基质浓度过高，医学教|育网搜集整理以防引起背景污染，冲洗困难，特别在冬天，易使涂片表面产生脂质沉淀，影响结果观察。

急性单核细胞白血病，急性粒—单核细胞白血病的幼稚细胞呈强阳性反应。急性粒细胞性白血病的幼稚细胞为弱阳性反应。早幼粒细胞白血病阳性强度可比急性单核细胞白血病，急性粒—单核细胞白血病更高。急性淋巴细胞白血病则为阴性，偶见局灶性分布的颗粒状阳性，巨核细胞血小板呈强阳性。α-NAE有助于急性单核细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性粒—单核细胞白血病与急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病的鉴别。

四、非特异性酯酶染色的临床意义

　非特异性酯酶染色三大临床意义：

1.非特异性酯酶又称单核细胞酯酶，主要存在于单核细胞和组织细胞内，正常单核细胞细胞各阶段均成阳性，且可被氟化钠抑制。

2.急性粒细胞白血病可呈阳性或弱阳性，急性早幼粒细胞白血病细胞呈强阳性，但不被氟化钠抑制。

3.急性淋巴细胞白血病一般为阴性。

非特异性酯酶(NSE)主要存在于单核细胞系，从原单细胞到成熟单核细胞其活性逐渐增强。在急性单核细胞性白血病时呈强阳性反应，但其活性能被氟化钠抑制。急性粒细胞性白血病时,有部分病例可呈弱阳性反应，但其活性不能被氟化钠抑制，有助于急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病的鉴别。

急性单核细胞白血病呈阳性反应，急性粒细胞白血病呈现弱阳性，急性粒—单核细胞白血病阳性程度介于急性粒细胞与急性单核细胞白血病之间，急早幼粒细胞白血病呈现阳性，急性淋巴细胞白血病含量较少，呈阴性或微弱阳性反应。AS-D-AE有助于急性单核细胞白血病，急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病及淋巴细胞白血病的鉴别诊断。